his蛋白掛柱效率低
C端6xhis蛋白(108kda)純化時,使用GE的6FF樹脂,載量為每毫升樹脂載40mg標(biāo)簽蛋白,確定不過載。
且質(zhì)粒測序結(jié)果正確,ORF框及his標(biāo)簽均正確。
嘗試將his標(biāo)簽增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改變上柱的粗酶液的濃度及上樣標(biāo)簽蛋白量也沒能改善
求助該如何解決呢
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C端6xhis蛋白(108kda)純化時,使用GE的6FF樹脂,載量為每毫升樹脂載40mg標(biāo)簽蛋白,確定不過載。
且質(zhì)粒測序結(jié)果正確,ORF框及his標(biāo)簽均正確。
嘗試將his標(biāo)簽增加至10his,或在N端再添加
6xhis后,仍在流出液中有大量目的蛋白存在。
改變上柱的粗酶液的濃度及上樣標(biāo)簽蛋白量也沒能改善
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
換標(biāo)簽
試試FLAG把
緩沖液pH多少?緩沖液里咪唑含量有多少?
GE的6FF樹脂什么的都無關(guān)緊要。你有用Ni樹脂或Co樹脂嘛?
1.上樣我們一般咪唑濃度20mM。2.載量我們一般計算動態(tài)載量,最大載量我們一般是不考慮的,動態(tài)載量一般是最大載量的百分之30。3.根據(jù)柱直徑,柱床高度,降低上樣速度。
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