同樣的模板,同樣的條件試劑,隔了一周就死活擴(kuò)不出目的條帶了
純菌菌液提取的基因組dna作為模板,25微升體系,目的條帶片段大小約350bp,上周都能擴(kuò)到清晰目的條帶,但這周重新跑就一直擴(kuò)不出來了,只有雜帶,marker2000很清晰應(yīng)該不是跑膠的問題。求解為什么,更換新的試劑、引物、水跑了七八遍了還是沒有,退火溫度也從50-60℃都嘗試過了。PCR反應(yīng)條件為:94℃/10 min; 94℃/30 s, 55℃/40 s, 72℃/1 min, 35個(gè)循環(huán); 72℃/10 min。
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重新提取dna試試?
是不是模板濃度降低了
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