EXPAR指數(shù)擴(kuò)增的問題~各位多多幫忙
為什么熒光定量結(jié)果表明沒有擴(kuò)增呢？
我的靶引物和模板濃度為0.1μM，是不是有點(diǎn)低啊。體系為20μL
還有就是模板的3端是否需要P修飾呢，我看有的文獻(xiàn)修飾，有的沒有。
救救孩子吧
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
質(zhì)粒模板么，濃度多高？
試劑是買的自己配，還是預(yù)混試劑直接用的？
不是質(zhì)粒，就是自己設(shè)計(jì)合成的單鏈DNA，終濃度為0.1μM，試劑是自己混的
如果是根據(jù)PNAS那篇文章里面提到的有: (1) nickase, (2)聚合酶, (3)引物或者靶標(biāo)序列內(nèi)含有切口沒識(shí)別序列, (4)反應(yīng)條件(buffer,尤其鎂離子濃度, 鹽濃度, pH值等), 一個(gè)個(gè)排除吧
自己混的試劑,沒有對(duì)比試劑,摸索會(huì)麻煩一下,good luck!
謝謝~已經(jīng)擴(kuò)出來啦嘻嘻嘻
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