DNA單鏈退火形成雙鏈
我自己設(shè)計(jì)了兩條完全互補(bǔ)的DNA單鏈，用純水稀釋，95℃熱激5min，室溫退火，通過凝膠電泳驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)只能形成很少的雙鏈。但是用同樣的操作處理文獻(xiàn)中的兩條單鏈DNA，是能夠成功合成大量的雙鏈的。有沒有大佬知道這是什么問題？
自己在網(wǎng)上嘗試了幾種退火緩沖，也更改過熱激溫度，但效果不明顯，到現(xiàn)在還是只有極少數(shù)的雙鏈，大部分序列還是單鏈，問題到底出在哪里
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
你可以問一下合成序列的公司，讓他們的銷售聯(lián)系一下技術(shù)服務(wù)。一般大一點(diǎn)公司都會(huì)做這些。
我沒做過這個(gè)，但是感覺這個(gè)要精確控制降溫速度吧！降低退火降溫速度，試試梯度降溫？
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短雙鏈退火是一件很容易的事情，隨便做都能成功
長(zhǎng)鏈、高GC含量、有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的，延長(zhǎng)高溫時(shí)間、用PCR儀緩慢降溫、加DMSO
你設(shè)計(jì)的片段有自身二聚體產(chǎn)生
用Unpack模擬分析一下
在一定濃度的含鎂離子（2-10mM）的tris緩沖溶液退火即可