之前跑膠沒有問題,怎么最近老出現(xiàn)在孔里很亮的現(xiàn)象啊,第3,4孔,有知道的小伙伴嗎?拜托了 返回小木蟲查看更多
首先,你應(yīng)該分析的是,經(jīng)常出現(xiàn)這樣異常現(xiàn)象是哪一類樣品?是pcr產(chǎn)物?是質(zhì)粒酶切?是基因組DNA?還是無論什么樣品都會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象呢? 因?yàn)椴恢滥阌袉栴}的樣品是什么,但從你的膠圖上看,marker和其他樣品均還是可以正常的遷移,證明瓊脂糖凝膠應(yīng)該沒大問題(為保險(xiǎn)也可所有緩沖液都換新的 嘗試)。 那么推測,你最近出現(xiàn)這種現(xiàn)象的樣品應(yīng)該是只有某一種類型的樣品,而且大概率是抽提的質(zhì);蛘呋蚪MDNA,比如3/4泳道的問題,大概率是你上樣樣品本身的問題,可以考慮是不是樣品提取處理的時(shí)候,有一些溶劑的殘留或者蛋白質(zhì)的殘留,可以多加一步除蛋白的步驟,降低樣品粘度,應(yīng)該會(huì)有一些緩解。 同時(shí),如果你的樣品本身分子量就比較大,比如基因組DNA,遷移速度很慢的,就有可能在你marker或其他小分子樣品已經(jīng)分布開時(shí),這類大分子的樣品還停留在樣品孔附近,按照大分子遷移慢的邏輯,這屬于正常的現(xiàn)象。當(dāng)然如果想解決這類大分子DNA檢測問題,你可以嘗試降低一些瓊脂糖凝膠的濃度(濃度高分辨率高,但不利于大分子分離,應(yīng)根據(jù)樣品的大小選擇合適濃度),增加一下膠的長度和電泳時(shí)間,這樣有助于大分子DNA的遷移分離,同時(shí)適當(dāng)降低上樣量可能會(huì)拿到一個(gè)相對(duì)漂亮一些的結(jié)果。 祝好,
是質(zhì)粒和基因組擴(kuò)增都出現(xiàn)過這種情況
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首先,你應(yīng)該分析的是,經(jīng)常出現(xiàn)這樣異常現(xiàn)象是哪一類樣品?是pcr產(chǎn)物?是質(zhì)粒酶切?是基因組DNA?還是無論什么樣品都會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象呢?
因?yàn)椴恢滥阌袉栴}的樣品是什么,但從你的膠圖上看,marker和其他樣品均還是可以正常的遷移,證明瓊脂糖凝膠應(yīng)該沒大問題(為保險(xiǎn)也可所有緩沖液都換新的 嘗試)。
那么推測,你最近出現(xiàn)這種現(xiàn)象的樣品應(yīng)該是只有某一種類型的樣品,而且大概率是抽提的質(zhì);蛘呋蚪MDNA,比如3/4泳道的問題,大概率是你上樣樣品本身的問題,可以考慮是不是樣品提取處理的時(shí)候,有一些溶劑的殘留或者蛋白質(zhì)的殘留,可以多加一步除蛋白的步驟,降低樣品粘度,應(yīng)該會(huì)有一些緩解。
同時(shí),如果你的樣品本身分子量就比較大,比如基因組DNA,遷移速度很慢的,就有可能在你marker或其他小分子樣品已經(jīng)分布開時(shí),這類大分子的樣品還停留在樣品孔附近,按照大分子遷移慢的邏輯,這屬于正常的現(xiàn)象。當(dāng)然如果想解決這類大分子DNA檢測問題,你可以嘗試降低一些瓊脂糖凝膠的濃度(濃度高分辨率高,但不利于大分子分離,應(yīng)根據(jù)樣品的大小選擇合適濃度),增加一下膠的長度和電泳時(shí)間,這樣有助于大分子DNA的遷移分離,同時(shí)適當(dāng)降低上樣量可能會(huì)拿到一個(gè)相對(duì)漂亮一些的結(jié)果。
祝好,
是質(zhì)粒和基因組擴(kuò)增都出現(xiàn)過這種情況
要考慮一下蛋白和RNA污染