目前想將我的目的基因插入到帶有嘌呤霉素的質(zhì)粒上，做吉布森Gibson assembly組裝的方法連了一個月了，沒有連接成功
如:目的基因是MT，嘌呤霉素基因是pac，質(zhì)粒為PA
設計同源臂引物：MT-up-F\R；MT-Pac-F\R;MT-dn-F/R;PA-F/R
一共設計4對引物，分別先進性PCR擴增，膠回收，條帶正確，然后用膠回收產(chǎn)物進行吉布森組裝將三個片段一起連接(MT-up和帶同源臂的嘌呤霉素基因MT-pac和MT-dn與PA載體連接，在進行轉(zhuǎn)化
求助的問題CR與膠回收的電泳圖條帶大小都正確，就是轉(zhuǎn)化完，第二天板子上什么也沒長，沒有單克隆出現(xiàn)?
不知道問題出在哪里了，有沒有小伙伴懂得，幫我分析一下，或者請教探討一下，謝謝

 返回小木蟲查看更多