overlap PcR 進(jìn)行啟動(dòng)子擴(kuò)增
最近在擴(kuò)啟動(dòng)子。普通方法怎么都擴(kuò)不出，想請(qǐng)教下大家怎么用overlap PcR 設(shè)計(jì)引物去擴(kuò)啟動(dòng)子。麻煩惹
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查一下就知道了 https://wenku.baidu.com/view/404 ... 1-wk_sea_vip-search
可以試試用nested PCR擴(kuò)增試試
首先你要去清楚一個(gè)問(wèn)題，overlap PCR也是常規(guī)普通PCR，只不過(guò)中間有一步是產(chǎn)物延伸而已，這種情況在啟動(dòng)子很長(zhǎng)擴(kuò)增較困難的時(shí)候，可以先嘗試短片段擴(kuò)增，然后通過(guò)overlapPCR鏈接成一個(gè)完整的啟動(dòng)子。要是你自始至終短片段都擴(kuò)增不出來(lái)的話，也就沒(méi)法做overlap了，還有版主說(shuō)的nested PCR，這是在第一輪擴(kuò)增出現(xiàn)彌散或者雜帶的情況下使用的，要是沒(méi)帶怎么能用nested PCR呢，回答問(wèn)題要有基本事實(shí)為依據(jù)，不要困擾其他人，