畢赤酵母蛋白表達(dá)不出來(lái)…
求助各位蟲(chóng)友們，我的畢赤酵母GS115+載體ppic9k，蛋白大小不到20kD，前面的步驟都做的沒(méi)問(wèn)題，也進(jìn)過(guò)核酸電泳驗(yàn)證過(guò)了，可是到了蛋白表達(dá)這一步，就是不表達(dá)…
跑蛋白電泳
1，濃度太低，直接跑基本沒(méi)東西。試過(guò)TCA和PEG濃縮之后，條帶與空白對(duì)照沒(méi)有相應(yīng)條帶。
2，經(jīng)過(guò)鎳柱純化之后基本沒(méi)有了…這樣應(yīng)該就是沒(méi)有表達(dá)出來(lái)了。也用考馬斯檢測(cè)的試了一下，基本藍(lán)色程度很低，說(shuō)明蛋白不多。
基本新手，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有人做過(guò)相應(yīng)的內(nèi)容，問(wèn)了很多朋友，但是做的東西不太一樣，想請(qǐng)教一下朋友們這下要怎么辦呢，感激不盡
ps：調(diào)整pH的方法還在做，周期較長(zhǎng)，換菌種載體什么的也不太清楚是否可以表達(dá)…
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號(hào)
建議先做做畢赤酵母胞內(nèi)表達(dá)。
你這個(gè)蛋白本身是屬于哪一種蛋白，像胞內(nèi)蛋白（但不是囊體和核內(nèi)的蛋白、胞外蛋白）用酵母做胞外表達(dá)是很有難度的，因?yàn)檎郫B環(huán)境不一樣很容易胞內(nèi)淤積或形成非可溶性蛋白。
我也是跟你一樣的問(wèn)題 gs115 x33 載體ppiczaA 特征與你一直 蛋白帶與酶活都是自欺欺人式表征。。。同求解決辦法
問(wèn)題解決了嗎？我也有同樣的問(wèn)題
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