本人采用red重組敲除，目的片段750bp左右，先電轉(zhuǎn)入含四環(huán)素抗性的pKD46質(zhì)粒，然后用阿拉伯糖誘導(dǎo)重組酶表達后制作成感受態(tài)，電擊轉(zhuǎn)化入重組片段（含上下游同源臂各250bp，卡那霉素抗性基因作為插入片段，總長2000bp），但是第二天平板上都沒有菌落生長

考慮問題：1.重組片段是不是太長，與目的基因長度相差太大導(dǎo)致重組失敗

2.電轉(zhuǎn)效率低，當(dāng)時電轉(zhuǎn)質(zhì)粒時只獲得一個克隆，可能是感受態(tài)制作不行？肺克莢膜很厚，離心的時候很難離到底，是否有解決方法？能否用固體培養(yǎng)基做阿拉伯糖的誘導(dǎo)？

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