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LAILIHONG25新蟲 (初入文壇)
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[求助]
代謝分析，緊急求助指點(diǎn)�。�！
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本人最近在鑒定一個新化合物在大鼠體內(nèi)形成的可能代謝物�；衔锝Y(jié)構(gòu)如A圖，化合物分子式C35H44N2O7S2，分子量668. Q-TOF負(fù)離子模式下化合物的二級質(zhì)譜圖如B圖，之前有請教過別人對二級質(zhì)譜進(jìn)行解析，解析結(jié)果如C圖。我在對肝臟結(jié)果進(jìn)行分析時，對比空白樣品，發(fā)現(xiàn)肝臟中存在715這樣的一種代謝物。但是在提取715的EIC圖時，發(fā)現(xiàn)提取出來的EIC圖有很多峰，且有些分離的不好。715的EIC圖為圖D�，F(xiàn)在就有以下幾個問題，緊急求助大神指導(dǎo)�。�！ 1、因?yàn)槲抑翱吹揭恍┐x相關(guān)文獻(xiàn)里存在同分異構(gòu)體代謝物的情況。參考了D圖中各個色譜峰對應(yīng)的質(zhì)譜圖，我認(rèn)為D圖中那些不同保留時間的色譜峰是715這個代謝物的不同同分異構(gòu)體。但是按照這樣分析，發(fā)現(xiàn)715的同分異構(gòu)體很多有10個，我不知道我對D圖的分析對不對？！還有這樣的色譜圖能用嗎？！因?yàn)榉蛛x的不是很好，我很擔(dān)心不能用，但是之前調(diào)節(jié)流動相比例后發(fā)現(xiàn)也沒有多大的改善，這個該如何解決？！求大神指導(dǎo)��！ 2、在對母藥二級碎片離子進(jìn)行分析時，發(fā)現(xiàn)碎片離子都是側(cè)鏈部分形成的，母環(huán)這部分沒有相關(guān)的特征離子，可能的原因是碰撞能量太大。不過這個碰撞能是儀器自行優(yōu)化的。因?yàn)榛衔锏奶卣魉槠x子與之后的代謝物鑒定息息相關(guān)，在這種情況下，確定母藥化合物的特征碎片離子，行嗎？��！ 3、在默認(rèn)2中可行的情況下，我對715的EIC圖中的各個色譜峰的二級質(zhì)譜進(jìn)行分析時，發(fā)現(xiàn)M1-M5的二級質(zhì)譜碎片離子一樣，為圖E（圖為代表圖）；M6-M9的二級質(zhì)譜圖為圖F（圖為代表圖）；M10的二級質(zhì)譜圖為圖G。根據(jù)它們的質(zhì)譜結(jié)果推測M1-M5可能是化合物側(cè)鏈硫醚鍵氧化+母環(huán)二羥基化的同分異構(gòu)體；M6-M9可能是化合物母環(huán)三羥基化的同分異構(gòu)體；M10可能是化合物硫醚鍵雙氧化+母環(huán)一羥基化的同分異構(gòu)體。在推斷可能的結(jié)構(gòu)時，參考了母藥二級質(zhì)譜的解析以及類似結(jié)構(gòu)化合物的代謝分析，但是因?yàn)樯鲜龃x物的二級碎片很少，且都是側(cè)鏈部分形成的，我只能做到上述的推斷，而不能再做進(jìn)一步的分析了。這樣對可能的代謝物進(jìn)行鑒定，行嗎？還有我對上述代謝物的形成方式的推斷正確嗎？ 本人是第一次接觸代謝分析，有很多不懂的地方，向周圍他人又沒法尋求幫助，只有在這請教各位大神了，問題有點(diǎn)多，老板催的緊，挺著急的，衷心希望各位大神能夠不吝指導(dǎo)，謝謝！��！ ps:上述圖片見附件 |
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2016-02-25 17:03:05, 94.5 K
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LAILIHONG25: 金幣+10, ★★★很有幫助 2016-02-26 11:43:15
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如果藥物原型為668， 那么你通過大鼠的代謝，得到715，增加了47， 你既然有高分辨，你可以得到：715的元素構(gòu)成，通過減去668的元素構(gòu)成，發(fā)現(xiàn)多了什么元素？以驗(yàn)證你推測的氧化和羥基化產(chǎn)物，但是上一個羥基，分子就增加16，兩個就多32，三個羥基是48。有可能上三個羥基。 你的668解釋的比較清楚，應(yīng)該沒有太大問題。但715的解釋沒有看到。 M1至M10的分子量分別列出來，如果只有很小的差別，說明它們是一組同分異構(gòu)體，如果你仔細(xì)比較了M1和M10的碎片，結(jié)合668比較，有可能發(fā)現(xiàn)715的羥基的位置。 以上是質(zhì)譜的工作。 我覺得你可能漏掉了一些代謝物，例如結(jié)合型的代謝物，你查過這個藥物的或者類似藥物的代謝規(guī)律嗎？例如有沒有葡萄糖醛酸結(jié)合型的？有沒有硫酸酯型的結(jié)合物？有沒有其他氨基酸結(jié)合型的？ 僅僅和空白比較還不夠。你的提取方法是什么？直接進(jìn)樣還是采用其他處理？你是否做過GC--MS? 液質(zhì)的結(jié)果只比較TIC的差異還是不夠的，因?yàn)門IC的明顯的你能看到，還有很多峰是要靠提取離子才能看到。如果你不知道的話，就會漏掉很多信息。你不是有代謝軟件嗎？先把這個藥物可能有的代謝途徑搞清楚，然后列一個表，把分子式，負(fù)模式的精確質(zhì)量算一下，然后去TIC上提取代謝后的和陰性對照的圖。 對于新發(fā)現(xiàn)的代謝物，結(jié)構(gòu)鑒定還要考慮液相分離，然后收集，然后通過核磁確定結(jié)構(gòu)。（當(dāng)然是有條件才行） |
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2樓2016-02-25 20:03:55
old_yang
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【答案】應(yīng)助回帖
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不知道你的藥物叫什么名字，看到結(jié)構(gòu)中有磺胺基團(tuán)，應(yīng)該有羥基的代謝物，給你一篇文獻(xiàn)參考參考吧。 你可以試試找一下上一個羥基的，兩個羥基的，三個甚至5個羥基的，還有其他的代謝途徑。多查類似文獻(xiàn)。 |
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2016-02-25 21:13:30, 312 K
3樓2016-02-25 21:13:32
LAILIHONG25
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送紅花一朵 |
首先非常感謝您的解答，我從中受益匪淺。 在對這個化合物進(jìn)行代謝物鑒定時，我是在參考沃尼妙林和磺胺類藥物代謝方式的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，同時也結(jié)合了代謝物預(yù)測軟件的預(yù)測結(jié)果進(jìn)行分析，不過目前并沒有發(fā)現(xiàn)II相結(jié)合型代謝物，但是發(fā)現(xiàn)此化合物的代謝方式與上述沃尼妙林相似。即主要是化合物發(fā)生氧化。因?yàn)槌松鲜龅?15，我還發(fā)現(xiàn)有683、699、731這些代謝物，而且每個代謝物仍像715那樣存在不同的同分異構(gòu)體。 但是在對它們的結(jié)構(gòu)進(jìn)行推斷時，由于二級質(zhì)譜碎片離子都是側(cè)鏈上形成的，只能對側(cè)鏈上的基團(tuán)變化情況進(jìn)行推測，而母環(huán)那部分如何變化則因?yàn)闆]有相關(guān)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，我只能通過參考與它有相似母環(huán)結(jié)構(gòu)的沃尼妙林的代謝方式進(jìn)行猜測（如當(dāng)715某個代謝物二級碎片離子跟母藥化合物668是一樣時，即碎片離子都是側(cè)鏈形成的且和母藥相比沒有發(fā)生變化，在參考沃尼妙林母環(huán)代謝方式的基礎(chǔ)上，我認(rèn)為此時化合物母環(huán)是發(fā)生了三羥基化，側(cè)鏈則沒有發(fā)生變化）。但是像這樣因代謝物中母環(huán)部分沒有相關(guān)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，而僅僅是參考了其它相似藥物的代謝方式對這個化合物的代謝方式進(jìn)行猜測，這樣鑒定的代謝物有說服力嗎？！能行嗎？！我現(xiàn)在很擔(dān)心這一點(diǎn)。衷心希望能再次得到您的幫助，謝謝!!! PS:附件是上述所說的沃尼妙林代謝的一篇文獻(xiàn) |
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2016-02-26 11:41:23, 3.02 M
4樓2016-02-26 11:41:40
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LAILIHONG25: 金幣+10, ★★★很有幫助 2016-02-27 10:27:08
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因?yàn)槌松鲜龅?15，我還發(fā)現(xiàn)有683、699、731這些代謝物，而且每個代謝物仍像715那樣存在不同的同分異構(gòu)體。 （1）這些都是代謝物，把測到的精確質(zhì)量，與原型藥物相減，比較出元素的異同，然后分析可能的代謝途徑； （2）你查的Valnemulin的文獻(xiàn)很有用，母環(huán)帶1-, 2, 3-OH的化合物都有，只要跟你的圖能對應(yīng)上就能應(yīng)該能解釋； （3）質(zhì)譜裂解規(guī)律多數(shù)是基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，所以，你可以選擇不同的碰撞電壓再做做，雖然你說電壓是優(yōu)化的，但對于數(shù)據(jù)的全面掌握不能只采用優(yōu)化的一種參數(shù)，應(yīng)該所有允許的范圍內(nèi)都看看，你會有新發(fā)現(xiàn)。 （4）如果這個類似的藥物同時含有磺胺和母核的兩種基團(tuán)，它的代謝途徑很可能兩種都有，這要仔細(xì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果去分析了，不能認(rèn)定一定是母核發(fā)生了改變，否則很可能漏掉一些信息。 （5）你做的藥物，雖然不是文獻(xiàn)中的那個，但文獻(xiàn)里提到藥物你有嗎？或者有類似結(jié)構(gòu)的藥物嗎？如果有結(jié)構(gòu)很接近的，你可以做幾個，作為對照品，一樣可以提供有用信息來解譜。 如果有可能，還需廣泛、深入、詳細(xì)查文獻(xiàn)，只要能支持解譜的文獻(xiàn)都是有用的，都可以做為依據(jù)來支持你的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)。 |
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5樓2016-02-26 13:24:30
old_yang
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【答案】應(yīng)助回帖
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多查類似文獻(xiàn)， 你的數(shù)據(jù)都是負(fù)模式的，正模式是否做過？ 有時候正模式的裂解和負(fù)模式是不同的，有些基團(tuán)在正模式下有很好的響應(yīng)，你應(yīng)該都做一下。 |
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6樓2016-02-26 13:57:24
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首先再次謝謝您的解答。您的建議對我很有用，之前我在這些方面欠缺考慮，今后我會在這些方面再分析看看。 然后我還想請教下您關(guān)于代謝途徑的推測。根據(jù)鑒定的代謝物對可能的代謝途徑進(jìn)行推測時，我看相關(guān)文獻(xiàn)中有些是根據(jù)代謝物出現(xiàn)的時間的先后順序及考慮一相、二相代謝物之間的轉(zhuǎn)換關(guān)系進(jìn)行的。但是像我上面所說的那些一羥基代謝物、二羥基代謝物、三羥基代謝物，因?yàn)樗鼈冊?小時的肝臟樣品中都存在，那我該如何去分析它們形成的可能途徑？我可以直接認(rèn)為它們都是由母藥化合物羥基化形成嗎？還有因?yàn)樗鼈冊?小時都出現(xiàn)，那該如何判斷它們之間有沒有轉(zhuǎn)換關(guān)系呢？ |
7樓2016-02-27 10:24:37
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藥物代謝方面的書中，藥物的一相代謝物是指羥化，還原，氧化，甲基化，去甲基化，等等都?xì)w為一相代謝，phase I; 而把藥物原型或者一相代謝物與其他分子結(jié)合的復(fù)合物稱為二相代謝， Phase II, 例如藥物和硫酸酯、葡萄糖醛酸、氨基酸、等等其他大一點(diǎn)的基團(tuán)結(jié)合的稱為二相代謝物； 有的藥物既這兩種代謝物都有，而有的藥物則只有某一相代謝物，這要看分子的理化性質(zhì)而定。一般，水溶性強(qiáng)的，極性強(qiáng)的分子，進(jìn)入生物體內(nèi)，很容易排出，因?yàn)樗苄院茫蛘甙l(fā)生了羥化后，水溶性更好，很快排出，而沒有時間和其他分子結(jié)合，所測到的都是一相代謝物；如果是極性弱的分子，就很難排出，因?yàn)橛H脂性，所以排出很慢，只有結(jié)合了某些基團(tuán)后，例如葡萄糖醛酸、硫酸根等才增大水溶性被排出體外。所形成的就是二相代謝物為主。 形成這些代謝物的種類不是以時間為依據(jù)劃分的，一小時也算很長了，生物體內(nèi)發(fā)生的催化反應(yīng)往往很快就發(fā)生了，很可能兩種都有。 你讀些藥代方面的書會好理解一些。 從實(shí)驗(yàn)角度看你的問題的話，應(yīng)該是對藥物不知道它如何代謝的，就先假設(shè)它會發(fā)生很多種代謝，因?yàn)閯游矬w內(nèi)各種酶都有，一個藥物來了， 肯定是和這些酶都接觸一下， 然后哪種酶能影響這個藥物，就發(fā)生什么結(jié)果。這種結(jié)果產(chǎn)生以后，例如，血被你采集了，或者肝細(xì)胞被你勻漿了，等等 你去檢測，看看能測到什么，與預(yù)先設(shè)想的一樣，那么就有某種代謝途徑（羥化），如果沒有發(fā)生變化，就是原型排出體外，這樣的藥物也有很多種。 |
8樓2016-02-27 14:32:15
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我可以直接認(rèn)為它們都是由母藥化合物羥基化形成嗎？ 可以直接認(rèn)為它們都是由母藥化合物羥基化形成 還有因?yàn)樗鼈冊?小時都出現(xiàn)，那該如何判斷它們之間有沒有轉(zhuǎn)換關(guān)系呢？ 目前，你的數(shù)據(jù)很難證明，它們之間有轉(zhuǎn)換關(guān)系。可能同時形成的，也可能是，逐漸形成的（1-OH, 2-OH, 3-OH） 不要局限在715只中， 還有大量的其他工作等你分析，715的10個異構(gòu)體只是一個實(shí)驗(yàn)結(jié)果，重點(diǎn)是其他的發(fā)現(xiàn)。還原、乙酰化、甲基化、等等。 |
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9樓2016-02-27 14:39:18
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非常謝謝您仔細(xì)的解答。不過我還有些問題想再請教您。 1、最近我在分析時發(fā)現(xiàn)有母環(huán)脫氫且羥基化的氧化代謝物，分子量為681、697、713、729，與上面的683、699、715、731相比少2，在用代謝軟件對母藥化合物進(jìn)行代謝預(yù)測時也發(fā)現(xiàn)有這種代謝方式且根據(jù)預(yù)測軟件提示，脫氫部位是在母環(huán)游離的羥基處。但是之前分析的母環(huán)羥基化代謝物也有游離羥基也能發(fā)生脫氫氧化反應(yīng)，那我該如何去判斷上述脫氫且羥基化的代謝物它們是化合物先脫氫后羥基化還是先羥基化后脫氫形成？或者是不是也有可能是由母藥化合物直接同時脫氫、羥基化形成？這種情況下可以根據(jù)哪些信息去判斷它們形成的先后順序？或者說關(guān)于脫氫、羥基化這2個代謝方式從常見的代謝原理的角度看有沒有先后順序之分，比如一定是先脫氫后羥基化或者相反，我在這方面沒有找到相關(guān)的資料，不知您是否有相關(guān)的經(jīng)驗(yàn)? 2、如果上面關(guān)于先羥基化還是先脫氫氧化無法確定，在這種情況下推測代謝途徑時，我能否把上述的可能性都考慮在內(nèi)來繪制可能的代謝途徑呢？個人理解是可以的，因?yàn)槲矣X得根據(jù)代謝物來推測的代謝途徑本身就是一種可能性而已，并不能完全確定？不知我的理解有沒有錯？ 3、從常見的代謝原理看，化合物側(cè)鏈部分硫醚鍵處可能發(fā)生雙氧化嗎？文獻(xiàn)中報道的有相似結(jié)構(gòu)的沃尼妙林代謝物中只有側(cè)鏈硫醚鍵發(fā)生單氧化的，但是我在分析過程中有發(fā)現(xiàn)側(cè)鏈雙氧化的，目前推測雙氧化是發(fā)生在硫醚鍵處，不過我不確定這種雙氧化合不合理，可能存在嗎？ 問題有點(diǎn)多，再次謝謝您之前對上述問題不厭其煩的解答，也衷心希望能再次得到您的指導(dǎo)。 祝愿您心想事成，萬事如意。 |
10樓2016-02-28 15:50:07
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[考研] 282求調(diào)劑 不挑專業(yè) 求收留 +3 | Yam. 2026-03-30 | 4/200 |
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[考研] 285求調(diào)劑 +6 | AZMK 2026-03-30 | 9/450 |
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[考博] 材料專業(yè)申博 +4 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 4/200 |
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[考研] 哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工專碩378求調(diào)劑 +3 | 塔比烏斯 2026-03-30 | 3/150 |
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[考研] 288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學(xué)上就行 +11 | lllllos 2026-03-30 | 11/550 |
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[考研] 359求調(diào)劑 +5 | 王了個楠 2026-03-25 | 5/250 |
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[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +12 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 12/600 |
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[考研] 0703一志愿9，初試成績：338，四六級已過，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +7 | Zuhui0306 2026-03-25 | 7/350 |
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[考研] 【求調(diào)劑】085601材料工程專碩 | 總分272 | +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
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[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-28 | 11/550 |
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[考研] 壓國家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
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[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
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[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
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[考研] 085602 307分 求調(diào)劑 +7 | 不知道叫什么！ 2026-03-26 | 7/350 |
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[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
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[考研] 一志愿211院校 344分 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)學(xué)碩，求調(diào)劑 +5 | 丶風(fēng)雪夜歸人丶 2026-03-26 | 8/400 |
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[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
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[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
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[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
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