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redking2012木蟲 (正式寫手)
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[交流]
ssDNA的純化問題
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最近在純化單鏈DNA，大概長5k，用qiagen的dna純化試劑盒純化之后，得到的產(chǎn)物量相當(dāng)?shù)�。貌似qiagen的試劑盒是專門為雙鏈DNA設(shè)計(jì)的。請問大家有沒有單鏈DNA的純化方法或者試劑盒 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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redking2012
木蟲 (正式寫手)
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3樓2016-02-28 04:48:48
oliviashane
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
redking2012: 金幣+5, 有用有幫助 2016-02-28 18:02:30
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
redking2012: 金幣+5, 有用有幫助 2016-02-28 18:02:30
| QIAquick PCR產(chǎn)物純化試劑盒（Qiagen）是可直接純化擴(kuò)增后的雙或單鏈PCR產(chǎn)物（100 bp-10 kb），最多純化得到10微克DNA，達(dá)到90-95%的回收率。你的回收率低是有很多原因的，比（1）切入多余凝膠使純化時(shí)瓊脂糖凝膠未完全融化。對此建議盡量切掉不含DNA的瓊脂糖凝膠，離心純化柱內(nèi)最大不要超過400mg瓊脂糖凝膠，或者增加溫育時(shí)間至15分鐘，每2分鐘混勻一次。（2）制備的瓊脂糖凝膠濃度過高。對此建議配制0.8%~1.0%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行回收。（3）有乙醇或異丙醇?xì)埩�，建議增加離心時(shí)間或增加靜置時(shí)間，使乙醇或異丙醇揮發(fā)完全。（4）洗脫溫度過低或洗脫時(shí)間過短。建議在加入無菌超純水或10 mM Tris·Cl（pH 8.5）后，于37℃溫育2分鐘。 |
4樓2016-02-28 13:35:21
pennchem
專家顧問 (正式寫手)
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5樓2016-02-28 14:47:58
redking2012
木蟲 (正式寫手)
8樓2016-03-01 16:02:36
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