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ken19860823木蟲 (正式寫手)
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[交流]
在hiPSC里面做過cas9的T7EI實驗的大佬過來指導(dǎo)下 已有1人參與
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本人2014年初接觸iPSC相關(guān)的基因修飾項目，當(dāng)時公司是用TALEN做的。我在14年中旬引入了cas9到我們實驗室（找北京公司代買的質(zhì)粒，ADDgene針對公司有點(diǎn)過了，我們這樣小公司做點(diǎn)小科研買個質(zhì)粒都買不到，真無語）。cas9比較方便吧，對于Talen來說原理簡單，實驗設(shè)計跟操作簡化了很多，現(xiàn)在基本淘汰了TALEN。在做cas9的CELI實驗的時候（也就是T7EI),首先我們也是找簡單的做的，在HEK293T里面做的（因為轉(zhuǎn)染效率高，我們實驗室用的PEI轉(zhuǎn)染的），跟張峰的文章圖片有差異，我跟他唯一用的不同的是最后拍照我用的是普通國產(chǎn)紫外照膠儀，其他的什么試劑預(yù)制膠都是根據(jù)他的那篇Nat protocol來的，小公司他說的那些照膠儀器我沒申請買。求做過的國內(nèi)實驗室大牛（有錢人）指導(dǎo)下，那個照膠儀是不是關(guān)鍵。圖一是我最近做的幾個位點(diǎn)的CELI圖，圖二是張峰實驗室做的CELI圖.做過的來指教，平時不怎么喜歡找論壇玩，覺得看文獻(xiàn)做實驗就行，現(xiàn)在覺得需要交流下，有時候一些小技術(shù)問題你也不可能去煩老板。cas9原理對于本人不重要，我基本當(dāng)個酶來用，所以來指教我怎么用cas9的，請出門左轉(zhuǎn)。想要學(xué)技術(shù)的，我就推薦個網(wǎng)站吧http://zlab.mit.edu/，不要來問我，我本科生。 圖2.png 圖一.png |
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2樓2018-04-17 14:28:36
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