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上官abc金蟲 (正式寫手)
王下七武海
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菌液PCR有條帶，質(zhì)粒雙酶切只有一條帶，是怎么回事？急！
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RACE PCR后經(jīng)過(guò)一系列步驟，到菌液PCR時(shí)有目的條帶，但很淺。 然后大量搖菌并提取質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，發(fā)現(xiàn)只有一條帶，貌似這條帶就是載體PMD18-T。上一次沒(méi)進(jìn)行雙酶切就送質(zhì)粒去測(cè)序，結(jié)果測(cè)序公司發(fā)回報(bào)告說(shuō)送去的是空載體。這次看來(lái)也是沒(méi)連上，實(shí)在不知道為何老是連不上PMD18-T，請(qǐng)各位大俠指點(diǎn)迷津，謝謝！ 我用的是寶生物的RACE和PMD18-T試劑盒，菌液PCR目的片段470bp左右，3'RACE得到的目的片段在2000bp左右。 雙酶切電泳圖 菌液PCR電泳圖 |
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菌液pcr很淺就是假陽(yáng)性，連T一般都沒(méi)問(wèn)題，你再試試是不是藥品問(wèn)題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-03-05 00:47:59
上官abc
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應(yīng)該是假陽(yáng)性，PCR體系或所用菌液中有污染，畢竟T載連這么大的片段那個(gè)效率是很低的。另外，3'RACE別沒(méi)事就搞那么大片段，這有點(diǎn)兒扯了。這種體系中親測(cè)還是500-1000比較靠譜，要不那個(gè)成功率太低。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-05 09:02:20
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9樓2016-03-07 17:36:52
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