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rahmeli新蟲 (初入文壇)
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[求助]
ROS求助 已有1人參與
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| 您好～前輩 我用的hek293細胞，培養(yǎng)于6孔板，細胞長到70%左右加入我的藥品一種真菌毒素 5和7兩個梯度。6h 后，細胞有微弱藥效，抽掉孔中10%Dmem,加200微胰酶消化，細胞呈塊落下后加10%deme終止消化。分別抽出到15ml離心管，2000轉(zhuǎn)5min,抽出dmem 分別加1ml pbs。2000轉(zhuǎn)5min。避光抽出pbs再各加濃度為25微摩的無血清Dcf孵育液2ml。錫紙包好放入37度培養(yǎng)箱，30min,每10min顛倒搖晃。30min后，2000轉(zhuǎn)5min,抽掉孵育液后各加2ml PBS,2000轉(zhuǎn)5min,抽出pbs再各加0.5ml pbs重懸轉(zhuǎn)入流式管。請問有什么問題嗎 為什么流式測出的峰，永遠在一起，陽性對照（提前2h加入150微摩的過氧化氫）也測不出 有沒有可能加藥后探針載不進去 麻煩各位前輩啦～ |
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AZURESKY1999
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rahmeli: 金幣+10 2016-03-07 15:19:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rahmeli: 金幣+10 2016-03-07 15:19:48
| 得首先按照試劑說明書操作，而且保證所設(shè)定的陽性對照和陰性對照結(jié)果是符合要求的，然后才能保證自己用藥物干預(yù)后的結(jié)果是可靠的。就你所描述的情況看，探針沒有裝載進去的可能性大，可以考慮重新裝載，裝載探針的量也是和細胞數(shù)量有關(guān)的，就是說讓細胞的數(shù)量和探針的數(shù)量成一定比例，可以考慮設(shè)定不同總數(shù)的細胞和固定數(shù)量的探針，做前期預(yù)試驗。 |
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rahmeli2樓2016-03-06 22:28:18
rahmeli
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-03-07 15:25:44
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