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【新手】DNS法測α淀粉酶 抑制實驗 反應(yīng)進(jìn)程曲線遇到問題 已有3人參與
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本人是個酶方面的新手，想做某種物質(zhì)對淀粉酶的抑制作用，這是第一次，采用的是DNS法測定產(chǎn)物糖的方法。 我是自己提取天然產(chǎn)物，然后買淀粉酶，測定天然產(chǎn)物對淀粉酶的抑制作用。 ① 我想先做反應(yīng)進(jìn)程曲線，確定合適的酶活和反應(yīng)時間。 a. 預(yù)實驗，1%的淀粉濃度，我選取了0.1濃度的酶，結(jié)果1-6min的OD值都是在0的上下浮動，我懷疑是淀粉酶失活了，或者濃度太低了（酶溶液一開始不懂，放在了冷藏一晚上，估計失活了） b.于是，我配置了1濃度的酶，然后配置完成立刻去測定，從1-10min的OD值都是0.5左右波動 c. 我蒙圈了，嗯，可能是酶濃度太大了，所以反應(yīng)很快，1min之內(nèi)就把所有淀粉都反應(yīng)成了糖。于是，我配置了0.6和0.3的濃度的酶，測定1-6min的OD值變化，然后0.3的不知道為什么是亂七八糟的，0.6的結(jié)果還行，1min的時候是0.2左右，但是從2min開始之后就全部都是0.5左右。 d.讓我很奔潰，合適的酶濃度和反應(yīng)時間，到底怎么才能準(zhǔn)確的測定出來，我的問題到底出在那里？？？ 如果說我的酶反應(yīng)飽和了。為什么OD的最大值才0.5左右，我看有幾個文獻(xiàn)都達(dá)到了1左右。 ② 看文獻(xiàn)，有的測定一種物質(zhì)對淀粉酶得抑制，做了陰性、陽性和空白對照，可是有的實驗就沒有陽性對照，一定要做嗎？ ③ 看文獻(xiàn)，有一篇文獻(xiàn)的抑制劑是有有機(jī)溶劑溶解的，就是水和乙醇一定比例，那我在想，乙醇不會對酶的活性產(chǎn)生影響嗎？這篇文章科學(xué)么，居然做出來，結(jié)果很好，而且還發(fā)表了！ 求大神幫忙，我是試了好多還不出滿意結(jié)果，感覺奔潰了！謝謝 |
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想做個好結(jié)果為什么這么難，半路出家好難 2樓2016-03-05 15:04:26
3樓2016-03-05 15:07:29
周珍珍
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4樓2016-03-07 08:07:23
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