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提取真菌胞內(nèi)蛋白的方法
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請教各位高人，我想提取木霉的胞內(nèi)活性蛋白，實驗室沒有試劑盒，按照幾篇文獻的方法如下提取： 1. PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)3天 2. 300毫克蝸牛酶加入20mlPBS中，伴有DTT50微升，消化離心洗凈的菌體5h 3. 將所得物低速離心，去上清，去除蝸牛酶 4. 將沉淀用尿素-碳酸鈉溶液冰浴30min后震蕩20min（因為尿素會讓蛋白變性，而我需要活性蛋白，所以我將這步改為：冰水重懸沉淀，超聲20min，8秒間隔，震蕩8S） 5. 將所得物低速離心，去除未破碎的菌體，上清理論上應(yīng)該就是內(nèi)蛋白 但上清跑蛋白膠后目標組和對照條帶基本一致，沒有區(qū)別，且看不出明顯清晰的條帶，這個方法明顯不行，請問各位高人有什么辦法，或者有什么有效的便宜點的試劑盒可以買的，多謝 |
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