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andyshang木蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR擴增時目的條帶很暗~ 已有3人參與
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這幾天一直在從酵母基因組上P基因,結(jié)果P出來的目的條帶很暗。 PCR用的酶是Primerstar，反應(yīng)體系是50ul,加的模板量是3ul，DNTP 4ul,buffer 10ul,引物各1ul，水30ul,酶0.5ul， 反應(yīng)程序： 98℃ 5min, 98℃ 15s, 50℃ 30s, 72℃ 1min30s 72℃ 10min Administrator 2016-03-23 11hr 59min.jpg |
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原海亮
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不清楚你的循環(huán)數(shù)有多少，退火溫度有點低，基因組做模板最好做個優(yōu)化，體系里面模板量可以減少，酶量可以提高些，50微升體系可以分裝兩管各25微升進行擴增，祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-23 17:51:13
yeruge
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
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- 注冊: 2015-11-01
- 專業(yè): 基因組學(xué)
2樓2016-03-23 17:29:42
3樓2016-03-23 17:38:24
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
5樓2016-03-23 18:35:39
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