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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 細胞被支原體污染了怎么辦
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細胞被支原體污染了怎么辦 已有3人參與
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支原體污染是細胞培養(yǎng)中一個普遍而且難以避免的問題，也是一個世界性的難題。細胞污染了支原體怎么辦？有些人會說，污染了就扔掉。事情就這么簡單嗎？ 有人發(fā)現自己養(yǎng)的一株細胞生長異常，檢測卻發(fā)現養(yǎng)的所有細胞都污染了支原體。 根據資料統(tǒng)計，全球范圍內有50%以上的細胞遭受到支原體污染�？梢�，僅僅簡單的扔掉支原體污染的細胞，是一件說起來容易做起來難的事情。 既然扔不起，那么污染了支原體怎么辦呢？下面就給大家介紹一種去除支原體的方法。 材料： 細胞系：SH-SY5Y 檢測試劑盒：Myco-P-20 (炎熙生物) 支原體清除劑：Myco-E-1 (炎熙生物) 方法與結果： 1， 將已檢測出有支原體污染的SH-SY5Y細胞以正常傳代密度鋪到6孔板中，一個孔加清除劑，作為測試孔，另一孔不加清除劑，作為陰性對照孔。兩孔之間間隔一個孔，以免互相污染。 2， 在清除支原體的過程中細胞以常規(guī)方法傳代培養(yǎng)。在加清除劑后第4、8、9、11天各取1毫升培養(yǎng)上清。每份上清與細胞已共培養(yǎng)48小時，除第9天的上清只共培養(yǎng)了24小時。 3， 將這些培養(yǎng)上清在16000g離心5分鐘，小心去除離心上清，將沉淀用無菌PBS洗三次，每次以16000g離心5分鐘。最后獲得的沉淀用100微升PBS重懸，在100℃水浴中孵育5分鐘，然后用于PCR反應。 4， 按照支原體檢測試劑盒Myco-P-20的說明書進行PCR檢測操作，結果如下： 4.1，與對照樣品共同反應，用這種方式可以判斷是否出現了假陰性結果。在加清除劑后第4天的樣品中仍可見到支原體陽性條帶（~440bp）， 在第8、9、11天的樣品中，已看不到支原體陽性條帶。 4.2，不加對照樣品，檢測樣品單獨反應，用這種方式可以提高測試靈敏度�？梢娫诘�8天和第9天的樣品中，支原體陽性條帶仍然出現，但是弱于第4天的樣品。在第11天的樣品中，有明顯的200bp以下的非特異的條帶，且亮度高于陽性條帶，所以判斷此時的PCR產物是非特異反應的產物，樣品中已沒有支原體DNA。 注釋： 由于PCR是一種非常靈敏的檢測方法，所以很容易出現假陽性條帶。假陽性條帶的出現主要是由于環(huán)境污染導致，其中的DNA模板可能是操作中帶入，也可能是所使用的耗材和器具等帶入。耗材和器具滅菌并不能消除假陽性，因為支原體死亡后殘留的DNA仍可以作為模板進行PCR反應，從而導致假陽性。所以謹慎操作和清潔的環(huán)境非常重要。 更多信息可以參考 www.biothrive.cn |
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longqi_2007 
新蟲 (初入文壇)
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- 蟲號: 1005412
- 注冊: 2010-04-25
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
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我們公司用過炎熙的這個支原體檢測試劑盒，實驗很簡單，靈敏度高，非常不錯。。。 現在我們是定期檢測了，兩周一次。這是他們的產品介紹，很詳細， http://www.biothrive.cn/Product/415769/ |
5樓2017-05-16 20:57:51
3樓2016-04-19 22:40:58
4樓2016-05-08 14:51:38
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