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小9999新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
想問(wèn)下做完酶切連接轉(zhuǎn)化后為什么菌斑長(zhǎng)不出來(lái)？ 已有3人參與
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想問(wèn)下做完酶切，與pet30質(zhì)粒連接16度過(guò)夜的目的基因，轉(zhuǎn)化后涂平板，為什么12小時(shí)后長(zhǎng)出來(lái)的菌斑是透明的，而且很少，幾乎沒(méi)有？應(yīng)該不是操作問(wèn)題，做了好幾遍，幾個(gè)人同時(shí)做的，幾乎都是這樣。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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五蘊(yùn)空
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2樓2016-03-29 12:42:01
小9999
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買的感受態(tài)，保存在負(fù)80度的冰箱的，在冰盒里融化的。應(yīng)該細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題吧。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
3樓2016-03-29 12:58:24
yzc937168
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4樓2016-03-29 15:07:18
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16度連接過(guò)夜了，連上了，別人用一樣的加抗生素kana固體培養(yǎng)基長(zhǎng)出來(lái)很多菌斑，不是抗生素和連接的問(wèn)題，會(huì)不會(huì)是表達(dá)載體選的不對(duì)？想問(wèn)下pet30適合什么樣的基因？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2016-03-29 18:03:18
yzc937168
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6樓2016-03-29 18:14:51
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嗯，我試試，請(qǐng)問(wèn)一般離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間多少才不會(huì)造成感受態(tài)細(xì)胞的破壞？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2016-03-29 20:21:26
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這個(gè)結(jié)果應(yīng)該和你片段載體酶切處理有關(guān)系吧，連接沒(méi)問(wèn)題，但是酶切效果不好的片段，照樣會(huì)效率低 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
8樓2016-03-30 12:18:24
9樓2016-03-30 17:13:26
小9999
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酶切后電泳了，大小沒(méi)錯(cuò)，而且可以看到有目的條帶，就是目的基因的濃度有點(diǎn)小，這次我把連接體系改了看能否有菌長(zhǎng)出來(lái)。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
10樓2016-03-31 16:17:31
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