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jackie在努力新蟲 (初入文壇)
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[求助]
有關(guān)大腸桿菌乳糖操縱子的問題
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最近在做大腸桿菌的敲除，現(xiàn)在準(zhǔn)備敲除lacZ基因，打算敲除整個(gè)lacZ,由于剛剛涉及這方面，于是想到了這樣以下可能有點(diǎn)亂七八糟的問題： 乳糖操縱子中的基因順序:（lacP+lacO）+（lacZ+lacY+lacA）；另外操縱子上游還有調(diào)控基因lacI 我知道的：CAP結(jié)合位點(diǎn)和RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)在lacP上，阻遏蛋白結(jié)合在lacO上，lacO和lacP是有重疊的 我想問的： ①lacO基因序列和lacZ序列的N端有沒有重疊的部分？如果有，我敲除整個(gè)lacZ(從起始密碼子到終止密碼子)會不會對阻遏蛋白的結(jié)合有影響，如果沒有，那么lacO和lacZ是緊挨著還是有spacer（比如隔了SD序列，其實(shí)我也不清楚lacO和SD序列是否有重疊） ②我在資料上看到lacZ 上游啟動子一段序列 5' -10 TGTTGTGTGGAA，這段序列和NCBI上K12 MG1655 相符合，而NCBI上BL21(DE3)基因組上為5’ -10 TGTTGTGTGAAA，一個(gè)G變?yōu)榱艘粋�(gè)A，請問有什么影響？ ③ NCBI上BL21（DE3）基因組中除了一個(gè)完整的lacZ基因外，在T7 RNA polymerase 上游還有一段450bp 的N-lacZ 基因，請問這個(gè)片段的編碼會不會分解乳糖，另外這個(gè)片段的敲除會不會對T7 RNA polymerase 的表達(dá)有影響？ 以上 |
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