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新手請(qǐng)教關(guān)于蛋白實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)問(wèn)題
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先說(shuō)下我要做的實(shí)驗(yàn)：將水凝膠負(fù)載蛋白質(zhì)放到EP管里并加入PBS，37℃水浴。每隔一個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出PBS，然后加入新的PBS。取出的PBS放入凍存管，低溫保存，最后一起做ELISA。 然后問(wèn)題來(lái)了： 1.以上實(shí)驗(yàn)步驟如做樣品、取PBS等操作是不是都嚴(yán)格要求無(wú)菌？我現(xiàn)在具備的條件是能保證各種實(shí)驗(yàn)器具滅菌，水凝膠前體溶液可以濾菌。但是因?yàn)槲視簳r(shí)無(wú)法用到超凈工作間，不能保證空氣無(wú)菌。因?yàn)橹皢?wèn)到過(guò)其他的人，似乎蛋白質(zhì)沒(méi)有核酸那么脆弱，而且我沒(méi)有用到培養(yǎng)基，PBS里面也基本不含有機(jī)物。那么究竟上述所有操作是不是都必須在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行？ 2.取出來(lái)的PBS保存應(yīng)該是在-80℃深低溫冰箱，如果用-190℃液氮罐保存行嗎？或者先用液氮速凍，然后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱可以嗎？這種溫度變化對(duì)蛋白活性有沒(méi)有影響？ |
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2樓2016-03-31 10:07:05
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