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立夏shelly銀蟲 (初入文壇)
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tricine-sds-page 電泳跑乳酸乳球菌發(fā)酵液中的Nisin總是跑不出怎么回事，結(jié)果還很詭異
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各位大神，我最近在用tricine-sds-page跑小分子電泳，乳酸乳球菌發(fā)酵液中的Nisin，大小在3.5-5KD之間，發(fā)酵液經(jīng)6倍濃縮了。但是跑了好多次都跑不出東西來(lái)，跑出來(lái)的結(jié)果還很詭異，感覺心好累啊╮(╯_╰)╭，誰(shuí)能幫忙看一下嗎 我沉淀蛋白的方法是用TCA法沉淀（新開封的TCA固體中加入227mL水配成100%的TCA溶液，用10%的TCA沉淀蛋白，后來(lái)我又做了個(gè)13%的），然后200ul冰丙酮洗2次。 膠濃度濃縮膠4%T、3%C，夾層膠10%T、3%C，16.5%T、3%C（加了尿素）。 幾乎每次都是這樣（如圖），Maker跑的好好的，樣品就是歪歪扭扭的，特別是我的發(fā)酵液樣品，跑一路下來(lái)都是那些東西，在最底下不知道是些什么，有可能是沒脫色干凈吧，但是整塊膠我都脫的差不多了~(╯﹏╰)。 我猜測(cè)可能是蛋白處理方面的問題，在網(wǎng)上看到說TCA若沒處理干凈可能會(huì)酸解蛋白（我每次沉淀完蛋白后溶解，蛋白都是棕色的，而且加了上樣緩沖液之后變成了黃色或綠色），所以我用丙酮好好地洗了三次，溶解后的蛋白溶液顏色沒那么深了，加了上樣緩沖液也沒有變黃，結(jié)果跑出來(lái)是這樣的 樣品泳道看上去是不臟了，但是下面的到底是有還是沒有�。�？？感覺好詭異 現(xiàn)在我什么方法都想了，~~~~(>_<  ~~~~我還濃縮了8倍和10倍的，結(jié)果都差不多，心好累，誰(shuí)能幫我看一下 |
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