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7631279新蟲 (初入文壇)
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[求助]
羧肽酶測(cè)酶活的問題
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我現(xiàn)在在做羧肽酶，剛接觸這個(gè)，不是很了解。 這是我查到的測(cè)羧肽酶A的步驟：底物為馬尿酰-L-苯基丙氨酸，測(cè)定濃度為10-3mol/L。緩沖液為0.025mol/L Tris-HCl，pH 7.65（含0.1mol/L NaCl），反應(yīng)溫度為25℃。反應(yīng)體系2.9ml加入酶液100μl后，立即搖勻校正零點(diǎn)開始計(jì)時(shí)。在254nm測(cè)其吸收度增值，每隔30s讀數(shù)一次，每分鐘光密度增加0.001定為一個(gè)酶活力單位。 有幾個(gè)問題： 第一，反應(yīng)溫度為25℃，這是指在進(jìn)行測(cè)定之前對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行預(yù)熱么。 第二，加入酶液后立即搖勻校正零點(diǎn)，是搖勻后馬上校正還是稍微等等。 第三，加入酶液后OD值很高，大約在1.4左右，對(duì)測(cè)定有沒有影響？還是需要稀釋酶液？ 各位大神，求幫助！ |
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