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lwk5716鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
求救，NEB的Q5高保真酶擴(kuò)增出現(xiàn)問題 已有2人參與
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各位大神，如題：我用普通的Taq酶擴(kuò)增目的片段1.6Kb左右，可以擴(kuò)出，且比較亮，但是下方有些非特異帶。換用NEB的Q5高保真酶，同樣的條件，就啥也沒有了，體系和程序用的說明書推薦的；以前看過蟲友遇到過這種問題，沒想到今天自己也遇到了，想問問大家的都最后如何解決的��？交流一下吧。郁悶啊 |
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適當(dāng)降低退火溫度試試吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-04-07 23:36:23
梅太奇阿拉干
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這兩個(gè)酶的buffer不一樣啊，一起用應(yīng)該有影響吧，這么做我也第一次聽說，也不懂呀 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-04-08 22:57:54
wqqlb
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6樓2016-04-09 00:30:58
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不能這么用，Q5具有外切酶活性，會(huì)切除3'突出末端，使片段平端話。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-04-10 09:07:01
Liumengya
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4樓2016-04-08 21:08:36
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7樓2016-04-09 08:13:06
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我用普通taq酶和高保真酶擴(kuò)增過同一基因，退火溫度完全不一樣，你可以用高保真酶說明書上較低的退火溫度擴(kuò)增一下試一下！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-04-10 12:11:57
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10樓2016-04-10 15:59:25
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