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一片丹心666新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大神們，求助RNA提取260/230低的問(wèn)題。 已有6人參與
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用艾德萊的試劑盒提取植物組織RNA，260/280正常，可就是260/230比值太低，幾乎都小于1。跑膠條帶也正常，28s比18s亮。之前提的一直正常，不知這兩次是怎么回事。請(qǐng)教各位這樣的RNA還能用嗎？我后期要反轉(zhuǎn)為cDNA做熒光定量，這樣會(huì)不會(huì)影響ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線啊。急急急，求建議。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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260/230比值偏小，是有鹽污染，解決的辦法是： 在乙醇洗脫步驟時(shí)： 1、75％乙醇，4℃，7500g/min，離心5min； 2、倒掉乙醇，再加入75％乙醇，條件同上，做第二次洗脫（注意，這次EP管在離心機(jī) 里的擺放方向與第一次相反，以便能更全面的洗脫）； 3、再次掉轉(zhuǎn)EP管在離心機(jī)中的方向（不再加入乙醇），7500g/min，4℃，離心3min 后，用200μl的槍小心吸去乙醇（注意不要吸到管底的RNA），然后開蓋晾干乙醇即 可。 這樣做后，比只用乙醇洗一次的效果要好很多，我們所提RNA用nanodrop測(cè)得260/230 值均在2.0左右。 注意倒掉乙醇后再離心一次，把沾在管壁的乙醇離下來(lái) 第三步很重要 |
6樓2016-04-11 19:37:56
18726912610
木蟲 (小有名氣)
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2樓2016-04-10 23:27:52
3樓2016-04-11 00:03:01
yy001519
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230測(cè)的是鹽濃度，做定量PCR的話要看你RNA的純度和濃度，以及反轉(zhuǎn)試劑盒的效率，一般濃度在500ng以上，純度在1.7~2之間都沒(méi)啥問(wèn)題的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-04-11 00:12:28
5樓2016-04-11 08:43:22
sandycool
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【答案】應(yīng)助回帖
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鹽分等雜質(zhì)太多，我是用了三次75%乙醇進(jìn)行洗滌的，你可以試試。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-04-11 21:09:41
sxxzwtx
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8樓2016-04-11 21:34:11
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260/230太小是因?yàn)辂}濃度高吧，可以再用75乙醇洗一次，然后用水溶解 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-04-11 21:38:37
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10樓2016-04-12 23:43:16
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