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木瓜蛋白酶 已有1人參與
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怎樣測定該物質(zhì)是木瓜蛋白酶? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲之王 (知名作家)
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木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(底物)水解而釋出N-苯甲酰-L-精氨酸,其釋出量可用氫氧化鈉液滴定,以此確定酶活力。 酶活單位 在25℃下,每分鐘內(nèi)能催化分解1umol底物的酶量,稱為1單位。 試液制備 1、底物溶液:準(zhǔn)確稱取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽1.42g,加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL,加適量水,用0.1mol/L氫氧化鈉液調(diào)節(jié)pH至6.2,最后定容至50.0mL。 2、待測酶液:取試樣用水稀釋至適當(dāng)濃度,并調(diào)節(jié)至pH6.2。 測定方法 25℃恒溫條件下,取25mL燒杯裝在pH自動(dòng)滴定儀上,加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化鈉溶液2.50mL、重蒸餾水1.25mL,混合后加入待測酶液后立即計(jì)時(shí),用0.1mol/L氫氧化鈉在電磁攪拌下連續(xù)滴定以保持pH6.2,記下每分鐘所耗0.01mol/L氫氧化鈉毫升數(shù)。同時(shí)進(jìn)行空白校正。按下式計(jì)算木瓜蛋白酶的活力P(單位/mg): P =C·ΔV·1000/W 式中:c:氫氧化鈉液的濃度,mol/L;ΔV:每分鐘消耗氫氧化鈉液的體積減去空白值;W:反應(yīng)液中木瓜蛋白酶的質(zhì)量,mg。 |
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