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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » DNA重組 » 去磷酸化
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[交流]
去磷酸化 已有5人參與
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如果要讓酶切后的載體和片段連起來，則片段要去磷酸化，為什么質(zhì)粒不用去磷酸化呢？還有，去磷酸化之后的片段和載體怎么連成完整的環(huán)狀？而不是只能連一端？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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liuderong
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為什么我們是相反的，片段一般不需要磷酸化，因為片段本身自連，即使能轉(zhuǎn)化進去，也是不會生長的，因為它沒有攜帶復制元件，抗性篩選等基因。而載體進行去磷酸化，可以顯著降低假陽性的出現(xiàn)，要知道質(zhì)粒載體自連是可以在感受態(tài)里自助復制，并影響你后續(xù)篩選克隆的。對于去磷酸化后連接是否完整，這個你可以去看看去磷酸化的原理，理論上好像是會有一個缺口，進入宿主后會被填補。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-04-20 21:01:42
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