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你的蛔蟲新蟲 (初入文壇)
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[求助]
用T4酶做載體自連接，不長(zhǎng)克隆，求大家給支招 已有1人參與
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| 最近在做質(zhì)粒構(gòu)建，目的載體11000bp,目的片段1000bp.之前一直在用TAKARA的in-fusion重組酶連接，無論怎么連都不長(zhǎng)菌，后來打算用T4連接，我先把單酶切的載體加T4連接酶做了自連接，看是否長(zhǎng)菌，結(jié)果這都不長(zhǎng)菌，載體自連接體系10ul,載體200ng左右�？剐院透惺軕B(tài)都沒有問題，做了陽(yáng)性對(duì)照。為什么載體自連接都不長(zhǎng)菌，這是不是很詭異，想破了腦袋，也分析不出原因，求各位有經(jīng)驗(yàn)的蟲友們分析原因 |
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增大目標(biāo)片段的濃度，設(shè)個(gè)鏈接梯度，1比1，1比2，1比3，1比4，然后混合后轉(zhuǎn)化試試 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-04-19 20:22:58
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3樓2016-04-23 01:38:36
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4樓2017-08-17 12:06:43
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10樓2017-08-20 23:44:48
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