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1379452403新蟲 (初入文壇)
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[交流]
PCR體系
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PCR體系一般根據(jù)什么確定啊，10，20，50ul體系有什么不同啊，其中的各個(gè)溫度和時(shí)間怎么確定啊，都依據(jù)什么啊，跪求大神指導(dǎo)啊，小菜鳥跪求啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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3樓2016-04-22 17:08:38
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2樓2016-04-22 16:34:14
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4樓2016-04-22 18:39:20
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我做的是25μL體系，用的r Taq酶，目標(biāo)產(chǎn)物是150bp，94度預(yù)變性5分鐘，94度變性30S，退火30S，72度延伸30S，72度7分鐘，循環(huán)為30～僅供參考 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-04-22 20:59:00
王箬竹
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pcr體系一般都是15微升，過多浪費(fèi)樣品和試劑，過少容易蒸干（一般如果只是做檢測，我都會加液體石蠟，防蒸發(fā)），如果是要做切膠回收，測序，一般都是選擇50體系。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-04-22 22:21:17
王箬竹
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常規(guī)PCR: 變性溫度一般94，退火溫度根據(jù)你的引物的Tm值而定，延伸溫度一般72度（特殊PCR各個(gè)溫度根據(jù)需求定） 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-04-22 22:24:17
王箬竹
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變性時(shí)間一般30秒就夠，退火時(shí)間20~30秒，延伸時(shí)間根據(jù)聚合酶的反應(yīng)和擴(kuò)增前段大小而定，酶的反應(yīng)速度說明書上都有！祝好運(yùn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-04-22 22:27:56
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