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香雪1311新蟲 (初入文壇)
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[求助]
植物愈傷組織總RNA提取結(jié)果 已有3人參與
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最近在做植物的愈傷組織總RNA提取，用的是TIANGEN的總RNA試劑盒，跑的電泳圖如下，但是測濃度和峰值后郁悶了，求高手指點~~ 10管樣品的260/280大概都在1.2-1.7，260/230在1.2-1.6，簡直瘋掉�。。。ㄖ耙蔡徇^幾次，260/280值在1.8-2.1之間，這次不知道怎么了，瞬間懵掉  ）RNA濃度測定都是700ng/微升左右，電泳上樣0.5微升，180V跑了20min。 想請教下各位有經(jīng)驗的前輩： 1.是不是有機試劑殘留的原因？ 2.我能不能用異丙醇或者無水乙醇把RNA重新沉淀一下，去掉雜質(zhì)？如果可以，請問有沒有這么做過的大神能分享下經(jīng)驗的？ 3.我的RNA是做cDNA-AFLP用的，下一步打算做個mRNA的純化，用的是上海生工純化mRNA的試劑盒，過Oligo（dT）吸附柱，想問如果是試劑殘留會對下一步純化mRNA構(gòu)成影響嗎？ 4.請問有用過上海生工純化mRNA的試劑盒的大神嗎？你們純化前的總RNA起始用量是多少？那個說明上好像要0.5mg，感覺太多了…… 新手金幣有限，請各位見諒，但是感謝的心意仍然是滿滿的，期待您的答復(fù)，拜謝！ 0424.JPG |
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樣點多了而已，稀釋后再跑膠試試，RNA應(yīng)該沒問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-04-26 10:57:23
jackyoung
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基本判定沒有降解，單雜質(zhì)偏多，有可能是有機試劑污染，從拖尾來看應(yīng)該不是乙醇，后續(xù)因為需要反轉(zhuǎn)錄可以用酒精沉淀一下，方法如下:（1.氯仿抽提，2.終濃度70%乙醇+0.3M NaOAc置-20℃沉淀30+min或過夜后離心，3.70%酒精漂洗●根據(jù)總RNA量決定操作方式●后離心收集沉淀，晾干后溶于DEPC水） 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-04-28 00:21:42
2樓2016-04-26 05:11:08
3樓2016-04-26 10:44:17
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9樓2016-04-29 00:04:56
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