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羥丙基葡聚糖凝膠柱臟了,如何再生 已有2人參與
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羥丙基葡聚糖凝膠柱臟了,如何再生，謝謝各位了 IMG_20160513_075728.jpg |
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良辰13145212樓2016-05-13 09:09:36
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良辰1314521: 金幣+3, ★有幫助 2016-05-16 20:18:09
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良辰1314521: 金幣+3, ★有幫助 2016-05-16 20:18:09
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他這種是LH系列的，不能用純水系列的溶液處理 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-05-16 07:48:06
hc-material
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良辰1314521: 金幣+10, ★★★很有幫助, 幫了我很大忙 2016-05-16 20:17:37
良辰1314521: 金幣+10, ★★★很有幫助, 幫了我很大忙 2016-05-16 20:17:37
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葡聚糖凝膠 LH-20使用說明 Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 Sephadex LH-20 是由葡聚糖G-25羥丙基化而成，屬于分子篩凝膠，尤其適用于天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。例如：類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等，Sephadex LH-20同時(shí)適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備，即可用于初步純化步驟，也可用與最終精制步驟，如非對(duì)映同分異構(gòu)體的分離。 1 層析原理: Sephadex LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因?yàn)槟z過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強(qiáng)，最后出柱。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH-20對(duì)化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強(qiáng)，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。 2 特點(diǎn): 適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物 結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子 載量可高達(dá)250mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變 3 Sephadex LH-20性質(zhì) 膠 粒 形 狀： 球形多孔 顆粒大�。ǜ桑� 18-111μm 排 阻 極 限： 4-5KD(球蛋白) 尺寸 排阻 模式： 小于總體積的20% 正相 分配 模式： 小于總體積的1% 最大 線性 流速： 720cm/h 參考 線性 流速： 60cm/h pH 穩(wěn) 定 性： 2-11 上 樣 量： 取決于所需分辨率 化 學(xué) 穩(wěn) 定 性： 在許多水溶液中穩(wěn)定 有機(jī)溶劑系統(tǒng)中穩(wěn)定 操 作 溫 度： 4℃-40℃ 4上樣量視被分離物的結(jié)構(gòu)性能的差異而定－差異大，則大；差異小，則小。 凝膠過濾的上樣量一般為5－7％的床體積，我們建議初次上樣量控制在1－2％的床體積，視分離情況可以逐步增加；柱高的選擇也與分離要求相關(guān)――難分物質(zhì)要有一定柱高和流速控制；流動(dòng)相可參考TLC的條件，正確的流動(dòng)相可以提高分離度并縮短分離時(shí)間。 流動(dòng)相的常用溶劑為：水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷 上述溶劑的極性依次降低，對(duì)帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）。 溶劑的溶解性，極性，沸點(diǎn)，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對(duì)被分離物質(zhì)間的極性和堿性差異比較小時(shí)采用。 甲醇通常對(duì)帶環(huán)狀(包括苯環(huán))物質(zhì)分離采用，葡聚糖凝膠對(duì)環(huán)狀物質(zhì)有強(qiáng)烈吸附。LH-20同時(shí)具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用。 5使用方法：將干粉浸泡于60—70％乙醇中過夜（充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑�，抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱，絕對(duì)不能出現(xiàn)凝膠斷層（否則要重新裝柱），動(dòng)態(tài)用一倍柱體積的60—70％乙醇淋洗，再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇⿷?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高.如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。 6 葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑。 葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫，以甲醇－－水系統(tǒng)最為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿－－甲醇最為常見，先用50％氯仿－－甲醇，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。 7樣品的處理和洗脫溶劑的選擇。 如果樣品極性大，選用反相溶劑洗脫（甲醇－－水），樣品用最少體積的甲醇－－水（盡可能甲醇少一些）溶解，過濾后，濕法上樣（必須要進(jìn)行過濾！否則把Sephadex LH-20 堵塞，就必須將Sephadex LH-20 的柱頭部分棄去，造成不必要的浪費(fèi)）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿－－甲醇），樣品用最少體積的氯仿－－甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。 8. 葡聚糖凝膠 LH-20的步驟。 (1) 選擇條件： 梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng)。我們實(shí)驗(yàn)室常用正己烷二氯甲烷甲醇系統(tǒng)，用了很多年，效果較好。 (2) 飽和層析柱： 用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身，讓其自然沉降，此時(shí)要防止氣泡留在其中。至少半小時(shí)打開開關(guān)，流出幾個(gè)柱體積的洗脫劑，目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。 (3) 樣品處理：用盡量少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾。 (4) 濕法上柱。這也是要有技巧的步驟。 (5) 洗脫：控制流速，一般1drop/s以下，可參見廠家的一些參數(shù);必要時(shí)更改極性（很多時(shí)一個(gè)極性就可以將樣品洗脫完畢）。 再生以備下次使用。 |
8樓2016-05-16 10:47:30
3樓2016-05-13 11:09:53
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