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矜天木蟲 (正式寫手)
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[交流]
什么鬼，切好質(zhì)粒放冰箱-20°C還會自連？
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最近做了個電轉(zhuǎn)，發(fā)現(xiàn)從冰箱拿出來的，切好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化居然長了好多藍(lán)斑。一個半月前做過差不過一樣的實(shí)驗(yàn)，當(dāng)時并沒有這種現(xiàn)象。 注： 質(zhì)粒是從takara買的載體pHSG299。 連接體系用的也是takara的T4連接酶。 堿性磷酸酶用的是takara的BAP。 內(nèi)切酶用的是Thermo的BamHI。 事情是這樣的： 一個半月前，從takara買來了載體pHSG299，打算建庫用，所以做了BamHI酶切、去磷酸化等預(yù)實(shí)驗(yàn)，順便驗(yàn)了感受態(tài)的效率。 當(dāng)時做的是化轉(zhuǎn)，結(jié)果如下。 可以看到感受態(tài)OK，各種測試都OK。 然而就這兩天，我又拿這些當(dāng)初保存的質(zhì)粒出來轉(zhuǎn)化作為對照，情況就開始不對了。 這次做的是電轉(zhuǎn)，結(jié)果如下。 這次除了保證了感受態(tài)的質(zhì)量，其他的。。。 我想問各位有見過這樣的情況嗎？單酶切的質(zhì)粒放在-20°C，包括做了去磷酸化的，還能夠自連？ |
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3樓2016-05-15 00:05:53
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5樓2016-05-16 09:43:22
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