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mechefy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物連接T載體測序缺失了部分片段
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如圖，我的片段大小5300bp左右，上下游分別是NcoI和SalI酶切位點，PCR擴增出目的片段連接pMD 19-T后挑了好多才挑到一個疑似陽性單菌落的測序，發(fā)現(xiàn)測序結(jié)果上游缺失了200bp多點，但是后面5100bp都是沒問題的。重復(fù)了三次酶切，單酶切SalI是可以切出來的，但是雙酶切和單酶切NcoI都做不出來（雙酶切條帶跟SalI單酶切一樣大，NcoI單酶切后依然跟質(zhì)粒一樣大的條帶），基本可以確定上游缺失了200bp多的片段。各位大神誰能分析分析什么原因？ xmc.jpg@biostar2009@飛約瘋?cè)嗽?/u>@wizardfan@youlinglyw |
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2樓2016-05-18 22:16:34
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4樓2017-03-29 19:06:05
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