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sephadex G50使用前怎么處理 已有3人參與
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sephadex G50使用前該怎么處理，是只需90℃水浴煮1h后脫氣就可以裝柱了嗎 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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wlt728
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1.化學和物理性質(zhì) 葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。 葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級也可用于批量工藝。 2.化學穩(wěn)定性 葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。 3.物理穩(wěn)定性 葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。 4.葡聚糖凝膠柱的使用方法： (1) 預處理 稱取Sephadex G-25（50－100目）約5g，加入蒸餾水100ml，置室溫下3h進行溶脹。 (2)裝柱 凝膠層析柱的直徑與柱長之比一般為1:15。柱的底部用裝有細玻璃管的橡皮塞塞緊，用洗凈的玻璃絲（約200目尼龍布）墊底或購買類似規(guī)格的商品柱。然后將柱垂直安裝好，先加入1/3柱體積蒸餾水，接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊連續(xù)裝入，使它們在柱內(nèi)自然沉降。同時大開下口慢速流出蒸餾水。裝柱后的凝膠必須均勻，不能有氣泡或明顯條紋。否則，必須到出重裝，裝好后，用蒸餾水平衡2－3h即可加樣品分離。 (3)加樣 加樣前，首先把柱內(nèi)凝膠上面多余的蒸餾水放出，直到柱內(nèi)液面與凝膠表面相齊（或留一極薄液層）為止。然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要讓溶液把凝膠沖松浮起，加完樣品后，打開下口緩慢放出液體至液面與凝膠面相齊，再用少量蒸餾水沖洗原來盛樣品的容器2－3次，待全部進入層析柱后，即可進行洗脫。 (4)洗脫與收集 洗脫時，用蒸餾水作洗脫劑，并且要連續(xù)不斷地進行，使凝膠柱上端保持一定的液層，防止凝膠柱表面的液體流干。本實驗洗脫液流出的速度應控制在0.8－1.0ml/min。洗脫液的收集采用分管連續(xù)順序收集，每管收集3ml，共收集10管。據(jù)經(jīng)驗，4或5號管核苷酸濃度最大，可作為層析鑒定的樣品液。但因?qū)游鲋L度的差異，管號會有變化，必要時可用紫外檢測A260nm，找出濃度最大的管號。 (5)凝膠的再生和回收 凝膠柱使用一次后，必須反沖疏松一次，平衡后再使用。若使用數(shù)次，就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢，將再生后的凝膠在布氏漏斗上用蒸餾水洗滌抽干，再用95%乙醇洗兩次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。 祝順利 |
4樓2016-05-20 11:03:50
Liumengya
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5樓2016-05-21 21:40:03
6樓2016-05-27 05:47:34
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