 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 403 | 回復(fù): 1 | |||
xmczhby新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
流式細(xì)胞儀標(biāo)本的制備 已有1人參與
|
|
流式細(xì)胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學(xué)、激光、計(jì)算機(jī)等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進(jìn)儀器，已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測(cè)人白細(xì)胞表面標(biāo)志可對(duì)白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對(duì)淋巴細(xì)胞群和亞群進(jìn)行精確分類，還能分離純化某一群或亞群細(xì)胞。 活細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測(cè)的標(biāo)本準(zhǔn)備，染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察，在某些實(shí)驗(yàn)條件下，活細(xì)胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果。 (一) 原理 活細(xì)胞表面保留有較完整的抗原或受體，先用特異性鼠源性單克隆抗體與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合，再用熒光標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，根據(jù)所測(cè)定的熒光強(qiáng)度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。 (二) 操作步驟 制備活性高的細(xì)胞懸液(培養(yǎng)細(xì)胞系、外周血單個(gè)核細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞等均可用于本法) ↓ 用10％FCS RPMI1640調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106～1×107／ml ↓ 取40μl細(xì)胞懸液加入預(yù)先有特異性McAb(5～50μl)的小玻璃管或塑料離心管，再加50μl 1∶20(用DPBS 稀釋)滅活正常兔血清 ↓4℃ 30min 用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2ml左右1000rpm×5min ↓ 棄上清，加入50μl工作濃度的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光標(biāo)記物，充分振搖 ↓ 4℃ 30min 用洗滌液洗滌2次，每次加液2ml左右1000rpm×5min ↓ 加適量固定液(如為FCM制備標(biāo)本，一般加入1ml固定液，如制片后在熒光顯微鏡下觀察， 視細(xì)胞濃度加入100～500μl固定液) ↓ FCM檢測(cè)或制片后熒光顯微鏡下觀察(標(biāo)本在試管中可保存5～7天) (三) 試劑和器材 1. 各種特異性單克隆抗體。 2. 熒光標(biāo)記的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗體，滅活正常兔血清。 3. 10％ FCS RPMI1640, DPBS、洗滌液、固定液(見附錄)。 4. 玻璃管、塑料管、離心機(jī)、熒光顯微鏡等。 (四) 注意事項(xiàng) 1. 整個(gè)操作在4℃下進(jìn)行，洗滌液中加有比常規(guī)防腐劑量高10倍的NaN３，上述實(shí)驗(yàn)條件是防止一抗結(jié)合細(xì)胞膜抗原后發(fā)生交聯(lián)、脫落。 2. 洗滌要充分，以避免游離抗體封閉二抗與細(xì)胞膜上一抗相結(jié)合，出現(xiàn)假陰性。 3. 加適量正常兔血清可封閉某些細(xì)胞表面免疫球蛋白Fc受體，降低和防止非特異性染色。 4. 細(xì)胞活性要好，否則易發(fā)生非特異性熒光染色。 附: 1. DPBS (×10, 貯存液) NaCl 80g KCl 2g 蒸餾水加至1000ml Na2HPO4 11.5g 臨用時(shí)用蒸餾水1∶10稀釋 KH2PO4 2g 2. 洗滌液 DPBS 900ml FCS 50ml (終濃度 5％) 4％NaN350ml (終濃度0.2％) 3. 固定液 DPBS 1000ml 葡萄糖 20g (終濃度2％) 甲 醛 10ml NaN3 0.2g (終濃度0.02％) 708F.tmp.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料科學(xué)與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
考研調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
343求調(diào)劑085601
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
08工科求調(diào)劑286
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
337求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601）
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
299求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
面上5B能上會(huì)嗎？
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
2樓2016-06-27 18:56:35
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xmczhby 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +7 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分 +4 | Shern—- 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +7 | 宋明欣 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+17
|
孅華 2026-03-22 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)280分求調(diào)劑 +10 | 722865 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 081700 調(diào)劑 267分 +11 | 迷人的哈哈 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|