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darlingbear新蟲 (小有名氣)
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小分子蛋白（約14kD）,需要在跑膠和轉(zhuǎn)膜上注意些什么 已有1人參與
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跑這種小分子蛋白對(duì)running buffer或trans buffer有沒有什么特殊的要求 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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電泳能做出來吧？染色后能看到目的條帶嗎？做WB要注意上樣量，上樣蛋白最好控制在20——40ug之間，轉(zhuǎn)膜一般用濕轉(zhuǎn)，14KD的蛋白用0.22um的膜、180mA，30分鐘即可。全程注意控溫，冰水浴轉(zhuǎn)膜。 封閉1——2h，一抗孵育最為關(guān)鍵！一抗的好壞直接影響最終結(jié)果。一般4℃孵育過夜，第二天多次清洗，二抗推薦用1:10000倍稀釋（影響背景值）。 WB最重要的就是一抗，其他步驟注意一下都挺好規(guī)范的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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darlingbear6樓2016-05-29 01:13:53
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7樓2016-05-30 09:59:49
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8樓2016-05-30 10:14:07
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