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[求助]
轉(zhuǎn)化問(wèn)題 已有3人參與
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做轉(zhuǎn)化之前沒出現(xiàn)什么差錯(cuò)，都是按照標(biāo)準(zhǔn)步驟來(lái)的，但是這個(gè)星期不管我重復(fù)多少次，都沒有長(zhǎng)出菌落，好不容易長(zhǎng)出的菌落是空載，我是先用T載體連接以后再轉(zhuǎn)化的，剛開始以為是轉(zhuǎn)化出了問(wèn)題，但是重復(fù)了三次都沒有長(zhǎng)出菌落，會(huì)不會(huì)是我切膠回收時(shí)候把A尾巴弄掉了，根本就沒有連上啊，不是轉(zhuǎn)化的問(wèn)題。。請(qǐng)求大家支招 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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fMssop
新蟲 (初入文壇)
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7樓2016-05-30 10:59:16
黃小萌萌
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。myprayer祝您科研順利，文章多多。 2016-05-26 17:54:33
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。myprayer祝您科研順利，文章多多。 2016-05-26 17:54:33
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有沒有做對(duì)照？沒有對(duì)照的話，出現(xiàn)問(wèn)題不好說(shuō) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-05-26 10:02:22
yesucao
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1、Taq酶是高保真還是普通的呢？普通的不需要加A，高保真的需要加A； 2、PCR產(chǎn)物有多大，PCR產(chǎn)物切膠純化后，是否電泳檢測(cè)有條帶呢？濃度大致有多少？ 3、連接時(shí)根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和濃度，大致判斷模板加入量，連接時(shí)間和溫度正常； 4、轉(zhuǎn)化時(shí)除考慮實(shí)驗(yàn)操作外，確保感受態(tài)沒有問(wèn)題； 5、菌液涂板時(shí)抗生素類型和濃度要求確保沒有問(wèn)題。 |
3樓2016-05-26 21:51:34
yaohuaibing
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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4樓2016-05-28 00:22:18
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