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1091038778新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助！小鼠腦組織石蠟切片染色脫片、爛片 已有2人參與
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protocol如下： 灌注取腦后，4%多聚甲醛4℃固定24-48h。修塊3-4mm。 脫水（常溫）：45%、55%、65%、75%、85%、95%、100%酒精各30min； 透明（常溫）：（100%酒精+二甲苯）/2 10min，二甲苯①20min，二甲苯②至完全透明（約20min） 浸蠟（60℃）：（二甲苯+石蠟①）/2 10min，石蠟①30min，石蠟②40min；石蠟①為低熔點，石蠟②為高熔點 包埋：浸蠟后用石蠟②手動包埋； 切片厚度：6um、（8um也切的有） 展片：40℃水中展片； 烤片：60攝氏度烤片機側(cè)烤約5min后吸去水分，轉(zhuǎn)移至60℃溫箱烤約4h； 脫蠟：烤片后趁蠟未凝固，進行脫蠟。二甲苯 5min×2，100%酒精 3min，95%酒精 2min， 85%酒精 2min，75%酒精 2min，流水沖洗 2min（放在缸子里用水泡的，換了幾次水）； 染色： HE染色：蘇木精 5-8min（新配為5min，時間長可為8min，用前過濾），流水沖洗 3min 1%鹽酸酒精分化 5s，流水沖洗 1min，0.1%伊紅 1-2min， 脫水：85%酒精 2min，95%酒精 2min，100%酒精 2min， 100%無水乙醇：二甲苯（1:1） 2min 透明：二甲苯（I） 3min，二甲苯（II） 3min ； CV染色：浸入CV染液中 10-20min， 脫水： 75%乙醇 2min， 85%乙醇 2min，95%乙醇 2min，100%無水乙醇 2min， 100%無水乙醇：二甲苯（1:1） 2min 透明： 二甲苯（I） 3min， 二甲苯（II） 3min； 封片：中性樹膠封片（整個染色過程避免干片）。 部分HE染色、CV染色片子結(jié)果如圖（附件）所示，基本上沒有完整的片子（染色時，片子隨著在液體里的時間脫片、爛片的程度加深），另CV染色著色淺。 請教論壇大神是什么原因？哪里出了問題，該怎么解決？ IMG_20160531_220018.jpg IMG_20160531_220022.jpg IMG_20160531_220057.jpg IMG_20160531_220106.jpg |
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我們是每個組織放到包埋盒里，然后過70-75-80-85-90-95-100x2～1：1各半小時，透明10min（皮膚，實驗室其它組織5min），透明成什么樣子沒拿出來看過，透明太久了組織太脆了，不好切，切的太厚了，染色后拍片清晰度不好調(diào)，自己也是菜鳥一枚，慎～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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