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zr340721新蟲 (初入文壇)
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[求助]
表達(dá)引物設(shè)計(jì)為什么要添加酶切位點(diǎn)？
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酶切位點(diǎn)的設(shè)計(jì)原則 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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引物的結(jié)構(gòu)：5’端—保護(hù)堿基+酶切位點(diǎn)+引物配對(duì)區(qū)—3’端—保護(hù)堿基 ①酶切位點(diǎn)應(yīng)是載體上的，所連接片斷上沒有這兩個(gè)位點(diǎn)，且距離不能太近； ②最好使用雙酶切效率高的，但兩個(gè)酶切點(diǎn)最好不要是同尾酶； ③退一般退火溫度為Tm-5度，退火溫度的計(jì)算可以不把加入的酶切位點(diǎn)及保護(hù)堿基考慮進(jìn)去； ④關(guān)于引物二聚體，最好用primer或是其他設(shè)計(jì)引物的軟件進(jìn)行計(jì)算一下 |
2樓2016-06-07 16:29:05
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