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yaiqi-87銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教酶的微膠囊制備中遇到的問題 已有1人參與
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有水溶性蛋白酶，最適PH值在3左右，在PH6,7,8條件下無酶活�，F(xiàn)想將該蛋白做成微膠囊，改變其最適PH值，使微膠囊在中性條件下能夠有部分酶活。具體操作步驟如下：首先用SPAN 80乳化液體石蠟，將（蛋白酶與海藻酸鈉的混合液）緩慢加入液體石蠟中，攪拌1小時后，然后加入氯化鈣水溶液固化微球。離心后棄去上層石蠟，下層水相中有白色沉淀，沉淀用水清洗3遍。顯微鏡下觀察該沉淀為透明小球，將沉淀重懸后，檢測酶活。 結(jié)果如圖所示，最適PH值基本無變化，而且在中心條件下基本無酶活。 請問：1.微膠囊的最適PH值未發(fā)生變化是否和微球的大小有直接關(guān)系？2.是否有其他方法能使該酶在中性條件下保持部分酶活？ 新手上路，希望大家多給意見!非常感謝！�。� 圖片1.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yaiqi-87: 金幣+20, ★有幫助 2016-06-13 08:17:46
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yaiqi-87: 金幣+20, ★有幫助 2016-06-13 08:17:46
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有以下幾點(diǎn)意見供參考：1，微膠囊化只是給物質(zhì)構(gòu)建一個微觀的環(huán)境，這個環(huán)境可能與周圍的大環(huán)境有所不同，并不能改變物質(zhì)固有的屬性。您的實驗中，酶的最高活性對應(yīng)的pH值，不會因為微膠囊化而改變。 2，對您的試驗思路，我的理解是這樣的，微膠囊內(nèi)部的pH應(yīng)該是3，微膠囊外部的pH是6、7或者8.這樣的話，您最開始配制酶溶液時就應(yīng)該設(shè)定好pH值。 3，如果第2條的理解是對的，這樣做的難度也是非常的大。因為你要體現(xiàn)出酶活性，膠囊壁就需要有一定的透性，反應(yīng)物要能夠進(jìn)出微膠囊才行；反應(yīng)物能夠進(jìn)出，勢必水分子和其他影響pH的鹽類等也會進(jìn)出，這樣微膠囊內(nèi)外部的pH就會趨近于變成一樣，酶的活性也就失去了。 4，如果第3條的理解是對的，或許好好調(diào)整微膠囊內(nèi)外的滲透壓會有點(diǎn)幫助。 |
2樓2016-06-12 22:07:02
yaiqi-87
銅蟲 (小有名氣)
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1.參考過其他文獻(xiàn)，文獻(xiàn)中報道的關(guān)于蛋白酶的微膠囊后，其最適PH值會偏移1~2個PH單位 2.裸酶溶液是中性的，只不過是在不同PH值的反應(yīng)底物溶液中反應(yīng)，然后根據(jù)反應(yīng)液中底物的消耗量來計算的酶活力，結(jié)果如上圖所示，同樣的包裹后的酶的酶活也是這么計算的 3.裸酶消耗底物后生成甲酸，，在囊化的微環(huán)境中應(yīng)該是偏酸性的，而與外環(huán)境中的緩沖液交換的話，我認(rèn)為投入的反應(yīng)液的PH值必須要偏中性，這樣反應(yīng)出來的最適PH值就會發(fā)生變化了。 謝謝您的回答 |
3樓2016-06-13 08:30:04
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