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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 分子生理 » 質粒提取
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夜影行風新蟲 (初入文壇)
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[求助]
質粒提取 已有3人參與
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| 我之前從別的老師那接了JM109，我所需要的目的基因在其質粒上（Amp抗性），經搖菌并用20%甘油保存、試劑盒提取、1%瓊脂糖凝膠電泳顯示單一條帶（約2500bp），目的基因能擴增出來。但是過了近一個月，我再用之前保存的甘油菌劃線、搖菌、試劑盒提取質粒、1%瓊脂糖凝膠電泳顯示單一條帶（近6000bp）。那么問題來了，同一株菌種提取得到的質粒大小竟然不一樣，我又做了幾次重復，提取出來的質粒大小都是近6000bp，都能擴增出來我所需要的目的基因！我不知道這是什么原因造成的？求大神解答！謝謝！ |
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kaobo2012
木蟲 (正式寫手)
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5樓2016-06-21 21:50:04
2樓2016-06-21 17:27:07
夜影行風
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-06-21 17:32:02
4樓2016-06-21 17:33:06
【答案】應助回帖
★
感謝參與，應助指數 +1
xn8008: 金幣+1, 應助指數+1, 鼓勵積極討論 2016-06-22 06:55:44
感謝參與，應助指數 +1
xn8008: 金幣+1, 應助指數+1, 鼓勵積極討論 2016-06-22 06:55:44
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1.如果連入外源基因，不大可能2500bp，一般來說；。puc18算是很小的了，也有2.7kb，所以你第一看到的是超螺旋狀態(tài)，至于大小，肯定比2500大。 2.一般我們提取質粒，看到的是超螺旋的，如果放置時間過長，也可能產生，解螺旋的，也就是好開環(huán)的，電泳速度低，但基本不會全部變成解螺旋的。 兩次看到的大小不同，個人感覺不大可能是因為構想導致，可能是質粒在大腸桿菌體內形成了二聚體，但這種情況，只是聽說過，沒有見過。 先進行單酶切看看。 |
6樓2016-06-21 22:20:26
7樓2016-06-21 22:21:43
匿名
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8樓2016-07-27 21:07:33
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