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RT-PCR失敗很多次，什么原因呢？ 已有1人參與
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新蟲一只，請各位有經(jīng)驗的師兄師姐前來蒞臨指導！~~ 這是我跑的RNA電泳條帶，不是說應該有三條帶嗎？我怎么只有兩條呢？RNA質量怎么樣��？能用于反轉錄嗎？我用博邁德植物EASYspin試劑盒提的，后來用eppendorf photometer plus 測的濃度稀釋2+198微升，稀釋100倍，但OD值不太正常，什么原因造成的呢，我反轉錄后pcr，都P不出來又有可能是什么原因呢？引物我用過很多次，沒問題啊，我做RT-PCR體系時，為了把模板濃度混勻，加之前用槍吹吸了幾次，會不會把cDNA弄斷了？反轉錄用的天根的FastQuant RT Kit，cDNA加了0到4微升都P不出來，說明跟模板量沒關，退火溫度也做了梯度51-57℃，也沒關，可是為什么P不出來啊，是反轉錄失敗嗎？會是RNA提取時有巰基乙醇或乙醇殘留的原因嗎？重點是OD值不正常啊，怎么看OD值啊？ 第一次提的RNA.jpg 左邊是RTPCR,右是新提的RNA.jpg 反轉錄后的cDNA濃度.jpg 反轉錄后的cDNA濃度.jpg 反轉錄后的cDNA濃度.jpg 反轉錄后的cDNA濃度.jpg RNA濃度.jpg RNA濃度.jpg RNA濃度.jpg RNA濃度.jpg |
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2樓2016-06-21 21:55:36
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3樓2016-06-22 09:13:40
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4樓2016-06-22 09:42:04
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rna沒降解就只有兩條，沒有5s的話質量很好，但是用試劑盒提取有個問題，有些試劑盒會把降解的rna過濾掉，所以給人錯覺提得不錯，我還是喜歡用trizol提，可以看清楚材料的質量，你的濃度可以的，不過你的260比280，260比230的數(shù)值好怪異 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-06-25 10:00:37
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