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sdjnyxn123銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)問我的SDS-PAGE每次條帶都跑得歪歪扭扭是怎么回事
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像圖里的一樣，都歪歪扭扭成那樣了，把Marker都快擠成一條線了 我是25uL樣品+25uL上樣緩沖液煮沸 然后點(diǎn)樣的時(shí)候取30uL上樣 marker上樣10uL 是因?yàn)辄c(diǎn)樣點(diǎn)多了嗎？ 幾乎每次都跑成這個(gè)樣子 另外有沒有比較好的脫色液配方 我一直用120mL水+60mL甲醇+20mL乙酸脫色 一般要過夜才能脫得差不多 有時(shí)候還脫得不夠，膠還是比較泛藍(lán)色 有沒有比較好的方法解決呢？ |
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七八的距離
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2樓2016-07-07 20:44:13
3樓2016-07-07 20:57:20
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【答案】應(yīng)助回帖
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xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-09 08:02:43
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-09 08:02:43
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marker和上樣液體積差太多了，體積不同會(huì)造成你這種情況，你可以酌情考慮。另外你可以減少染色的時(shí)間啊，這樣脫色就不需要那么長(zhǎng)時(shí)間咯 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-07-09 01:33:35
zxp466561162
銀蟲 (小有名氣)
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5樓2016-07-09 10:36:23
Bioexperixgs
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試一下在兩邊分別加30的loading buffer，maker孔也加loadingbuffer補(bǔ)齊�？傊�，所有孔的上樣體積一樣，且兩邊各加一個(gè)額外只有buffer的孔 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-07-12 09:02:47
Bioexperixgs
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此外，上樣體積可以減少，明顯你這圖的蛋白量很高。sds-page能夠檢測(cè)到100ng的蛋白，所以放心的減少。想必第一個(gè)是包涵體，第二個(gè)是上清。pet系統(tǒng)有一個(gè)上樣量的計(jì)算公式，你可以按照公式進(jìn)行計(jì)算 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-07-12 09:05:50
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