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yuguiyan至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
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[求助]
原核表達(dá)想做SDS PAGE怎么處理樣品 已有2人參與
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用的是pGEX.載體，菌液想做SDS PAGE應(yīng)該如何處理樣品呀？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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yuguiyan
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
2樓2016-07-10 12:40:01
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xn8008: 金幣+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-11 07:04:28
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是大腸桿菌么？一般簡(jiǎn)單檢測(cè)直接菌體煮沸即可用于上樣，也可以超聲破碎后，將上清沉淀都檢測(cè)，看看目的蛋白表達(dá)情況。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2016-07-10 20:54:50
yuguiyan
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需要既超聲又煮沸嗎？ 超聲頻率和時(shí)間是多少呀？ 是在沉淀中加水然后加SDS上樣緩沖液，然后煮沸嗎？ 需要用到細(xì)菌裂解液?jiǎn)幔?br /> 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2016-07-10 21:21:53
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-07-11 07:04:40
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如果是大腸桿菌的話，就是你收集菌體，用PBS緩沖液重懸一下，一般2mM ph7.0 PBS就可以，實(shí)在沒(méi)有用水也可以，重懸一般是比原有菌液濃縮十倍左右吧，具體超聲參數(shù)我記不得了，不同意思效果不一，不過(guò)大腸還是很好破碎的，不需要額外加裂解液，破碎完以后，離心將上清沉淀分離。沉淀用和上清等體積的PBS重懸，然后取一些加loading buffer進(jìn)行檢測(cè)，看你的目的蛋白是在上清還是包涵體內(nèi)，祝好。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2016-07-10 21:49:06
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6樓2016-07-10 22:01:56
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7樓2016-07-10 22:11:12
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8樓2016-07-10 22:18:44
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9樓2016-07-10 22:25:14
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10樓2016-07-10 22:25:40
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