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shigm1121新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
質(zhì)粒酶切 已有3人參與
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各位學(xué)友：我再用Kpn1和Sac1酶切我構(gòu)建的載體pBI121—GFP,沒(méi)有切到我的目標(biāo)基因GFP，在此求助。 我用的體系是40μl 建立如下雙酶切反應(yīng)體系: dH2O 14μl 10XL buffer 4μl 質(zhì)粒DNA 20μl Kpn1 1μl Sac1 1μl (2)37℃保溫 5h (3)65℃保溫 10 min滅活限制酶" |
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18716248350
新蟲(chóng) (小有名氣)
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2樓2016-07-10 17:28:39
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3樓2016-07-10 17:29:00
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-11 06:59:11
西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-11 06:59:11
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哎呀，實(shí)在不好意思，這手機(jī)出問(wèn)題了，首先考慮重組載體上是否連上了GFP，然后兩個(gè)酶公用buffer有沒(méi)選對(duì)，酶有沒(méi)有過(guò)期，你質(zhì)粒濃度多大的加了20ul，一般1ul酶切1ug質(zhì)粒，然后過(guò)夜酶切效果會(huì)較好，如果要回收可以先用20ul小體系切開(kāi)了再加大體積做回收 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
4樓2016-07-10 17:33:01
奮斗的勤快蟲(chóng) 
新蟲(chóng) (初入文壇)
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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5樓2016-07-11 00:27:01
凱倫愛(ài)佳佳
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6樓2016-07-11 00:52:15
不愛(ài)做實(shí)驗(yàn)
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7樓2016-07-11 10:28:47
鬼羽帝魂
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8樓2016-07-11 17:02:37
shigm1121
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9樓2016-07-12 08:12:41
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就是先做一管20ul體系的把酶切體系時(shí)間這些條件摸好，然后同時(shí)做5管酶切，純化或者膠回收時(shí)全部吸附到一個(gè)柱子上。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
10樓2016-07-12 09:33:54
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