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lusandanooo銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
載體雙酶切后，回收不到任何東西？ 已有1人參與
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載體切了3ug，大小3k。沒有做膠回收，直接做的產(chǎn)物純化，用過生工和天根的試劑盒，做了好幾次了，結(jié)果沒有得到任何東西，雙酶切跑了電泳條帶是對的。排除操作可能，因為我是跟PCR產(chǎn)物一起做的，PCR產(chǎn)物回收到了，回收率70%，但載體一點都沒回收到。 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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lusandanooo
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2樓2016-08-31 16:07:17
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5樓2016-09-02 09:13:38
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切了10ug，已經(jīng)很多了。我是電泳能看見，但紫外檢測不到，260/280的值總是1.3左右。如果不定量的話我不知道該加多少載體啊…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-09-02 10:47:04
lusandanooo
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7樓2016-09-02 15:20:09
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有些質(zhì)粒就是這么惡心，實在不行硬上得了，切完直接純化回收后做連接，連接RT半小時就可以了，取個1ul做轉(zhuǎn)化，祝好，實在不行把這段需要的用PCR的方法P出來，然后酶切回收，說不定就成了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-09-02 20:41:34
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也可以用同源重組的方法，設(shè)計一對引物用來P載體，這對都帶上目的片段的一部分，然后接助assembly kit進(jìn)行同源重組就行了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-09-02 20:46:46
10樓2016-09-02 20:47:52
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