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[交流] 腫瘤免疫細(xì)胞化學(xué) 已有1人參與

在神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中，以膠質(zhì)瘤最多見，次為腦膜瘤、神經(jīng)鞘膜瘤和垂體腺瘤，再次為孤立性神經(jīng)纖維瘤、神經(jīng)纖維瘤病、叢狀神經(jīng)纖維瘤、節(jié)　細(xì)胞瘤、節(jié)　細(xì)胞神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤以及轉(zhuǎn)移瘤等，其余各類腫瘤均屬少見。這些腫瘤，一般情況下，應(yīng)用H・E染色，在光鏡下便可作出病理診斷。但是，有時(shí)對(duì)其細(xì)胞起源、細(xì)胞學(xué)類型、分化程度，特別是各腫瘤間的鑒別，診斷相當(dāng)困難。近10多年以來，免疫細(xì)胞化學(xué)的興起，尤其是PAP、ABC、ABPAP、免疫金銀等靈敏性高的染色法，加上特異性很強(qiáng)的單克隆抗體的問世，使得常規(guī)石蠟切片可以被用作免疫細(xì)胞化學(xué)染色，從而開辟了免疫細(xì)胞化學(xué)在神經(jīng)腫瘤領(lǐng)域里廣泛應(yīng)用的新途徑，往日的一些難題有些已獲得解決，有些正在深入研究并積累了經(jīng)驗(yàn)。

腫瘤組織可產(chǎn)生多種多樣的抗原，通過這些抗原成分可以識(shí)別各種腫瘤，迄今在石蠟切片上具有診斷價(jià)值的抗原已經(jīng)有100多種，在神經(jīng)腫瘤診斷和研究中具有重要價(jià)值的，有下述幾種，它們可作為標(biāo)記物供檢測(cè)和研究應(yīng)用。

一、細(xì)胞骨架中的中間絲蛋白

在細(xì)胞骨架中有三種結(jié)構(gòu)，即微管（microtubules,MT ）、微絲（microfilaments,MF）和直徑介于上二者之間的中間絲（intermediate Filaments, IF）。各種細(xì)胞的IF都具有相同的結(jié)構(gòu)和不溶于水的特性，但可根據(jù)其組織學(xué)分布、生物化學(xué)和免疫學(xué)特性，將其分為五種類型，即細(xì)胞角蛋白細(xì)絲（cytokeratin filaments, Ckfilaments）、波形細(xì)絲（Vimentin filaments）、結(jié)蛋白細(xì)絲（desmin fila－ments）、膠質(zhì)細(xì)絲（glial filaments, GF）、神經(jīng)細(xì)絲（neurofilaments NF），它們分別由細(xì)胞角蛋白（CK）、波形細(xì)絲蛋白、結(jié)蛋白、膠質(zhì)細(xì)絲酸性蛋白和神經(jīng)細(xì)絲蛋白構(gòu)成。上述五型IF蛋白在組織學(xué)分布上具有一定的特性。這種特異性是各種組織在胚胎發(fā)育過程中獲得并一直維持下來的，即使在腫瘤中瘤細(xì)胞仍能基本保持其起源細(xì)胞的IF類型，故IF蛋白的免疫組化定位有助于確定腫瘤組織的起源。對(duì)神經(jīng)腫瘤具有診斷和鑒別診斷價(jià)值的主要有以下二種：

（一）神經(jīng)細(xì)絲酸性蛋白

神經(jīng)細(xì)絲酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）可從正常人腦及病人腦中分離獲得，含有豐富的天門冬氨酸和谷氨酸，分子量47000道爾頓。早期，Emg與Bigbee報(bào)道，GFAP抗體在星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及其腫瘤內(nèi)呈特異性地定位，其它膠質(zhì)成分、神經(jīng)元及其腫瘤均不著色。后來，人們發(fā)現(xiàn)，GFAP不僅在星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及其腫瘤中存在，還見于各類型的星形細(xì)胞、混合性膠質(zhì)瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、室管膜瘤、室管膜下巨細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤、含膠質(zhì)成分的髓母細(xì)胞瘤和神經(jīng)鞘瘤等腫瘤中。目前，人們認(rèn)為，GFAP在神經(jīng)腫瘤診斷和研究中的價(jià)值在于：①GFAP能確定腫瘤的膠質(zhì)性質(zhì)，特別是星形膠質(zhì)細(xì)胞的起源，能清楚顯示在H・E染色下難以辨認(rèn)的混合性膠質(zhì)瘤中的星形膠質(zhì)成分，確定原始神經(jīng)腫瘤的膠質(zhì)分化，以及與轉(zhuǎn)移瘤、腦膜瘤的鑒別。②GFAP與星形細(xì)胞瘤的分化程度相關(guān)，可根據(jù)免疫組化著色的程度評(píng)價(jià)腫瘤的惡性程度和細(xì)胞分化程度，為臨床提供治療和預(yù)后的參考。

GFAP在星形細(xì)胞瘤顯示兩種染色類型，一種是泡漿和細(xì)胞突起的彌漫性著色，主要見于分化好的星形細(xì)胞瘤，例如，纖維性星形細(xì)胞瘤和肥胖細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤；另一種是膠質(zhì)網(wǎng)的著色，在分化好的和間變性星形細(xì)胞瘤以及多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中都可見到。在分化好的星形細(xì)胞瘤，陽(yáng)性細(xì)胞多且免疫組化染色深；在間變性星形細(xì)胞瘤，陽(yáng)性細(xì)胞少且染色淺；在肥胖細(xì)胞性星形細(xì)胞中，胞漿豐富的大瘤細(xì)胞陽(yáng)性，小瘤細(xì)胞陰性。

GFAP在少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤、脈絡(luò)叢乳頭狀瘤、松果體實(shí)質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤和腦膜肉瘤、顱咽管瘤、血管母細(xì)胞瘤及黑色素瘤等為陰性。在室管膜瘤的報(bào)道中，各家說法不一，有陽(yáng)性也有陰性的報(bào)道。這種情況可能與室管膜上皮的類型不同有關(guān)。一種室管膜上皮是立方形，數(shù)量多，胞漿中有8～10nm的中間絲，與星形細(xì)胞的不同，GFAP陰性；另一種室管膜上皮是伸張狀細(xì)胞，數(shù)量少，散在于立方形細(xì)胞之間，GFAP陽(yáng)性染色。上述二種上皮可各自形成室管膜瘤，GFAP染色各異。

（二）神經(jīng)細(xì)絲

神經(jīng)細(xì)絲（neurofilaments, NF）分布于神經(jīng)原細(xì)胞體和軸突、樹突，副交感神經(jīng)節(jié)　，腎上腺內(nèi)外嗜鉻組織等，因此，節(jié)　神經(jīng)瘤、腎上腺內(nèi)或外神經(jīng)母細(xì)胞瘤、小腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤、副節(jié)　神經(jīng)瘤均呈NF陽(yáng)性反應(yīng)，并且，分化較好的腫瘤的NF陽(yáng)性瘤細(xì)胞數(shù)量要比分化差的多，在兒童的未分化神經(jīng)母細(xì)胞瘤常呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。NF免疫細(xì)胞化學(xué)染色有助于神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的鑒別診斷和預(yù)后估計(jì)，特別在骨轉(zhuǎn)移性神經(jīng)母細(xì)胞瘤與原發(fā)性淋巴瘤及尤文氏瘤鑒別診斷中，前者陽(yáng)性而后二者均為陰性，甚有作用。

二、神經(jīng)特異性烯醇化酶

烯醇化酶是糖酵解過程中催化2―磷酸甘油酸與磷酸烯醇式丙酮酸互相轉(zhuǎn)化的水解酶。已知烯醇化酶有多個(gè)同工酶，它們是三個(gè)基因位點(diǎn)的產(chǎn)物，由α、β和γ三種免疫學(xué)上不同的亞單位所組成的二聚體，αα、ββ和γγ三種為純合的烯醇化酶，還有αγ和αβ二種雜合的烯醇化酶。神經(jīng)烯酶化醇主要是γγ型，其次是αγ型。以前認(rèn)為只存在于神經(jīng)元，故命名為神經(jīng)元特異性烯醇酶（neuron-specific enolase, NSE），出已證明，除神經(jīng)元外，它們亦存在于神經(jīng)纖維和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（APUD細(xì)胞），表現(xiàn)為細(xì)胞漿陽(yáng)性染色。在星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦室管膜瘤、少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤和雪旺氏細(xì)胞瘤中，NSE染色為陰性。

對(duì)NSE的保存，福爾馬林固定的組織免疫組化反應(yīng)較弱，而苦味酸、多聚甲醛溶液反應(yīng)良好。

三、S―100蛋白

1965年，Moor從牛腦浸液中分離出一種高度酸性鈣結(jié)合蛋白，富含苯丙氨酸，分子量21kD，它在中性飽和硫酸銨溶液中100%溶解而命名為S―100蛋白（S―100protein）。早期，人們認(rèn)為S―100蛋白是一種神經(jīng)系統(tǒng)特異性蛋白，存在于膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺氏細(xì)胞以及它們的腫瘤中，后來的研究工作證明S―100蛋白也存在于一些非神經(jīng)源性的正常細(xì)胞和腫瘤中。在福爾馬林固定、石蠟包埋組織中，S―100蛋白保存良好，可用兔抗牛S―100蛋白抗血清進(jìn)行染色，陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為胞漿或同時(shí)伴有細(xì)胞核彌漫性著色。S―100蛋白染色強(qiáng)度與瘤細(xì)胞的分化程度關(guān)系不大。

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，S―100蛋白廣泛分布于星形細(xì)胞、少枝膠質(zhì)細(xì)胞、室管膜細(xì)胞及其起源的腫瘤中。連錦英等對(duì)122例顱內(nèi)腫瘤作了S―100蛋白和GFAP分布的研究，發(fā)現(xiàn)S―100蛋白在各類型星形細(xì)胞瘤、混合性膠質(zhì)瘤全部陽(yáng)性，大多數(shù)少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和室管膜瘤陽(yáng)性，絕大多數(shù)髓母細(xì)胞瘤中可見少量S―100蛋白陽(yáng)性細(xì)胞。在部分腦膜瘤、顱咽管瘤、聽神經(jīng)瘤、血管母細(xì)胞瘤等亦可見S―100蛋白陽(yáng)性。S―100蛋白有助于脈絡(luò)從乳頭狀癌與轉(zhuǎn)移性乳頭狀癌的區(qū)別，前者S―100蛋白陽(yáng)性，后者為陰性。

在周圍神經(jīng)系統(tǒng)，S―100蛋白廣泛分布于神經(jīng)嵴起源的雪旺氏細(xì)胞及其腫瘤中。在神經(jīng)鞘腫瘤和各種神經(jīng)纖維瘤中，良性神經(jīng)鞘瘤S―100蛋白含量最高，陽(yáng)性細(xì)胞多，染色也強(qiáng)，An－toni A區(qū)的瘤細(xì)胞中S―100蛋白呈均勻地分布于胞漿和核內(nèi)，而Antoni B區(qū)的瘤細(xì)胞排列疏松，S―100蛋白染色不規(guī)則，纖維化區(qū)缺乏S―100蛋白；神經(jīng)纖維瘤中可見S―100蛋白陽(yáng)性和陰性兩種細(xì)胞，顯示它們的來源可能不同，前者可能是雪旺氏細(xì)胞，后者可能是來源于神經(jīng)周膜和神經(jīng)內(nèi)膜細(xì)胞。大部分神經(jīng)源性肉瘤含有S―100蛋白，顯示來自于雪旺氏細(xì)胞。這些腫瘤對(duì)S―100蛋白的反應(yīng)一般比良性者弱，而且，在高度間變的腫瘤，由于瘤細(xì)胞的反向分化，常喪失合成S―100蛋白的能力。

在神經(jīng)腫瘤診斷和研究中，除上述三種常用標(biāo)記物外，還有一些標(biāo)記物可供選擇或配合應(yīng)用：①谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase, GS），其組織中分布與GFAP相同；②髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein, MBP），用于少枝膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞及其腫瘤檢測(cè)，特別對(duì)惡性神經(jīng)鞘瘤診斷有意義；③髓鞘相關(guān)糖蛋白（myelin associated glycoprotein, MAG），可用于少枝膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞及其腫瘤檢測(cè)，但與多種腫瘤出現(xiàn)交叉反應(yīng)；④少枝膠質(zhì)細(xì)胞表面抗原，共有4個(gè)亞型，O1 和O2 出現(xiàn)在少枝膠質(zhì)細(xì)胞及其腫瘤不成熟或分化低時(shí)，O3 和O4 出現(xiàn)于成熟或分化高時(shí)，等。

對(duì)某種類型的腫瘤來說，不是所有的這種腫瘤都表達(dá)相同的抗原；同樣，對(duì)某一個(gè)腫瘤來說，也不是所有的腫瘤都有一樣的抗原，因此，在神經(jīng)腫瘤診斷上，二種以上標(biāo)記物的聯(lián)合應(yīng)用比用單一標(biāo)記物更為可靠。

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1樓 2016-07-14 18:00:06

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Smile85

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