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bb123456789金蟲 (正式寫手)
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[交流]
預(yù)測(cè)膜蛋白的原核表達(dá)
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| 最近，在做一個(gè)基因的功能驗(yàn)證。通過(guò)前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該基因有兩個(gè)不同的isoforms，一個(gè)不含信號(hào)肽及跨膜域（P1），另外一個(gè)（P2）N端比P1對(duì)30個(gè)aa，含有信號(hào)肽同時(shí)N端含有跨膜結(jié)構(gòu)域（1-5aa在胞內(nèi)，6-29aa跨膜）。原核表達(dá)時(shí)（載體用的pET28a），P1能成功誘導(dǎo)出來(lái)為可溶形式，但P2無(wú)法誘導(dǎo)。在做誘導(dǎo)前，對(duì)P1做了截短實(shí)驗(yàn)，截短的片段無(wú)法誘導(dǎo)出目的蛋白。P2在預(yù)測(cè)的起始密碼子下游15個(gè)核苷酸之后還存在一個(gè)起始密碼子，目前，我擔(dān)心是不是P2的起始密碼子不對(duì)，所以無(wú)法誘導(dǎo)表達(dá)或者是不是真核生物中的膜蛋白在原核中本身就比較難表達(dá)呢？于此，想請(qǐng)教有經(jīng)驗(yàn)的蟲友指點(diǎn)一下，下一步該怎么做呢？謝謝。 |
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xuweitao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 7420.2
- 紅花: 15
- 帖子: 1044
- 在線: 728.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 201353
- 注冊(cè): 2006-02-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2016-07-18 08:30:36
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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5樓2018-03-22 15:10:24
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