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洛一7輪新蟲 (初入文壇)
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[求助]
電泳條帶分析 已有1人參與
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電泳條帶如下，退火梯度依次為55，56，57，58，59，60（兩管一個梯度）只有59和60跑出來非常模糊。最后兩管是二次pcr電泳出來的結(jié)果。目的基因應該在靠近倒數(shù)第三條帶處的，不知道為什么出來的都只有在第二條那，求分析求解答。 我的模板量3ul,體系25,上下引各1ul,跑了50分鐘 瓊脂糖1*5%，電壓90，用的是12.5ul的2*Taq master mix @biostar2009 @wizardfan @飛約瘋?cè)嗽?/u> @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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洛一7輪
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2樓2016-07-15 19:59:14
洛一7輪
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3樓2016-07-15 20:00:46
原海亮
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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膠拍的太模糊，你為什么不把退火溫度再增加試試呢，比如到65，甚至70，我是覺得你這樣做一個5度的溫度差，梯度的意義不大，一般pcr可以選擇50到65試試，每個梯度可以相差個兩三度，這樣才能體現(xiàn)出來退火溫度的影響。不知道你的循環(huán)數(shù)多少，模板是什么DNA，引物質(zhì)量都會影響到 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-07-17 11:28:02
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