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dingxianlo金蟲 (正式寫手)
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[求助]
根癌農(nóng)桿菌單克隆搖菌搖不出來(lái) 已有2人參與
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| 各位大俠，有個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教大家！本實(shí)驗(yàn)室做的轉(zhuǎn)基因，將含目的基因的過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細(xì)胞后涂于YEB固體培養(yǎng)基（含50ug/ml Kana和50ug/ml Rif）能正常長(zhǎng)出單克隆，可是小搖和大搖只有極少數(shù)能搖出來(lái)，而且小搖菌檢都有目的條帶。小搖和大搖抗生素濃度與固體培養(yǎng)基一致。以前都是能正常搖出來(lái)的，可是從這學(xué)期開(kāi)始不知咋的，老是出問(wèn)題，請(qǐng)大家賜教！ |
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ccqqsunshine
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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dingxianlo: 金幣+1, ★有幫助 2016-09-09 23:03:53
dingxianlo: 金幣+1, ★有幫助 2016-09-09 23:03:53
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EHA105自身基因組抗性rif，vir質(zhì)�？剐詓trep，目標(biāo)基因kana的話我建議你三種抗生素篩出單克隆再繼續(xù)搖菌吧， 搖菌體積至少1：10容積比這樣保證培養(yǎng)沒(méi)有問(wèn)題：1ml菌在10ml的指形管（或其他）里搖； 另外你用個(gè)溫度計(jì)測(cè)下?lián)u床溫度，因?yàn)閾u沒(méi)搖你能看到，但溫度有時(shí)出問(wèn)題，不好發(fā)現(xiàn)。 |
2樓2016-09-07 00:14:13
3樓2016-09-09 09:46:08
tuodecai
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
希望能得到你的幫助。謝謝！ 4樓2018-05-30 20:30:27
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